【中国农业大学CAU考研 生物化学】核酸45.pptx

第三节RNA结构;RNA的一级、二级和三级结构;RNA分为三类;一、tRNA结构 一级结构： 73-94个核苷酸 25kD, 沉降系数4 S (3) 3’-末端均为 CpCpAOH (4) 5’-端为pG,也有pC （5）有许多稀有碱基 ;Ψ ：假尿嘧啶核苷是尿嘧啶核苷的异构体，是嘧啶的C5和戊糖C1相连。D：二氢尿嘧啶是尿嘧啶5和6位加两个H;tRNA二级结构为三叶草，具四臂四环;tRNA依靠氢键折叠成三级结构;3’端CCA的A的3’－OH连接活化的氨基酸;反密码子识别mRNA上的密码子;小结：tRNA结构特征：;二、 rRNA: 核糖体RNA;原核生物5SrRNA二级结构（120nt，G－ 116nt，G＋）;原核生物16SrRNA十分保守;三、mRNA：信使RNA;原核生物mRNA为多顺反子,真核生物mRNA为单顺反子顺反子指的是一个编码区加上合成蛋白所需的调节序列，有时也叫基因。;真核生物mRNA结构;5’-m7G5’ppp5’NmpNmp--帽子结构;; Diagram of the "typical" eukaryotic protein-coding gene;;第五节基因组;Genome：细胞或生物体的全部遗传物质;一、病毒基因组为DNA或RNA;二、大肠杆菌基因组DNA;脚手架（scaffold）结构;三、真核生物基因组;核小体(nucleosome)每个核小体包含了约200bp的DNA和5种组蛋白;组蛋白核心颗粒由4种组蛋白各两分子组成八聚体，核心DNA链（146bp）在八聚体外缠绕1.75圈。;组蛋白H1结合在DNA双链的进出口端，犹如一个搭扣将DNA链固定;连接DNA将核心颗粒连接，构成串珠状结构。;核小体组成的串珠状纤维盘绕成中空的螺线管结构，也称为染色质纤丝。（是染色体包装的第二层次）;真核生物染色体DNA组装结构层次;螺线管缠绕在非组蛋白支架上，形成纤维突环，进一步盘绕成染色单体。;第五节 核酸的理化性质及分离提纯;一、核酸的理化性质;1、溶解性质;2、两性解离;3、酸水解和碱水解;RNA碱水解（碱性条件下，DNA磷酸二酯键稳定，RNA不稳定）;4、沉降速度RNA>DNA>protein;5、紫外吸收核酸最大吸收峰260nm;1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 33μg/ml单链DNA 40μg/ml RNA 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0;二. 核酸的变性、复性及分子杂交;DNA变性是指在理化因素作用下，DNA分??中的氢键断裂，碱基堆积力遭到破坏，双螺旋结构解体，双链分开形成单链的过程。 但并不涉及共价键的断裂。;增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。？？？？;DNA热变性的特点是爆发式的; Tm值: 双螺旋结构失去一半时的温度称该DNA的熔点 或熔解温度, 用Tm值表示，一般在80-95℃.;;(G＋C)%＝2.44（Tm－69.3）;2. DNA的复性（renaturation）;Polymerase chain reaction（PCR）;变性，退火，延伸;3. 分子杂交 (molecular hybridization) ;分子杂交 (molecular hybridization) ;;三、 核酸的分离提纯（自学） 关键是保持核酸的完整性;作业：;本章复习要点;