ELISA设置阴性、阳性、空白对照涉及实验结果有效性评价.pdfVIP

ELISA设置阴性、阳性、空白对照涉及实验结果有效性评价

一．ELISA试验有效性与三项对照

什么是“有效性”（Validity）？要获得准确的检测结果“有效性”评价，就会关系到：为什么要设置“阴性、阳性

和空白”等不可缺少的三项对照？要用什么样的物质担当“阴性、阳性和空白对照（品）”？这“三项对照”如何设

置、需要设置几个孔位？获得的测定值如何“认可、取舍与计算”？随后，又如何依照阳性对照均值（PCx）与阴性

对照均值（NCx）的差值（P-N，或N-P）大小做出“试验结果有效性”的最终裁决呢？…等等，这一连串的问题，

在国外“正规”品牌的ELISA试剂《使用说明书》中都有明细和详尽的说明。既有理论要点提示，又有具体细致的

举例解说。很可惜，在90年前后，国内兴起ELISA检测热潮之际，在一片“国外试剂说明书太详细、太复杂、不容

易看明白、…”等等“一片埋冤”声中，正好迎合国内商家的“意愿”。从此以后，国产ELISA试剂的说明书，越来越

简单。这其中商家就有两个“好处”：好处之一，用A4、或B5，甚至比B5还要小的一张纸，代替国际试剂的好几页

的“使用说明书”（等同于一份“操作手册”），每年就可节省一大笔印刷成本费；好处之二，如同国际试剂说明书

上向用户交待的各种表明本试剂质量有关的详尽内容，国产试剂的所谓“说明书”上统统可以“删除、回避、拒绝”

向用户通报和承诺。我90年前后收集的美雅培、法巴斯德、荷阿克苏等相关试剂的原文说明书，几经搬动

全都处理，很是可惜。近日，杭州检疫局朋友送了一份生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗

原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》。对照阅读之下，深深感到这才是一份真正意义上的《使用说明

书》呀！在我下文提到的若干“概念、问题”，从中都可以找到答案。我现在参照我本人1993年的《肝炎ELISA试

剂质量与检测结果有效性评价》会议讲稿相关内容，就“三项对照与检测结果有效性”表示如下认识和讨论。二．

三项对照要求与用途ELISA检测，按照试剂说明书要求，每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照和用途：

5ZJ8Y_h

1．空白对照：仅用稀释液代替检测样本、用以观测最终反应的显色“本底”、并用于酶标仪消除、扣除“本底”，

即：以本底为“零”读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值（A）；或者，在计算阴性对照均值（NCx）、阳

性对照均值（PCx）、样本读数的S/C.O.值时减去空白对照的本底吸光值。早年的酶标仪无自动扣除空白对照孔读

数功能，这种酶标议现已淘汰不用了，写上这段话的意思是补充说明设置空白对照的用途。空白孔具体如何读取

读数，则依照说明书操作。例如，生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒

（酶联免疫法）使用说明书》上提示：以空气读空白（不放板架和板条），在450nm（单波长）、或450nm和620

—700mn（底物是TMB）参考波长进行读数。

2．阴性对照（品）：o7~4__jAA

（1）阴性对照（品）的概念与要求：所谓阴性对照（品），应当是本项检测试验中采用与待捡物（样品、人用试

剂就是人的血清等）具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并能客观比较和鉴别处理因素（血清免疫学试验

中有特异性抗原与抗体反应）之间的差异。因此，用动物血清或其制品（如牛血清白蛋白等）代替阴性人血清作

为对照品，从理论和实践上都是不可取的，弊端甚多，无须细述。注意：据我所知，国产ELISA试剂中，有的厂

牌是用动物血清制品稀释配置、或与部分人血清混合配置的；其二，阴性对照读数，并非是“越低越好”。NCx值

接近0.00X水平，这是假象！试想一下，真正采用“阴性人血清”的阴性对照品，NCx值会如此之低吗？举个例子，

雅培乙肝六项EIA试剂的NCx值，分别为：0.010（HBsAg）、0.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗—

HBe）、1.065（抗—HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV试剂NCx是0.091。辨别试剂NCx值是否合

理的一个很简单的方法，只要对比大量阴性样本的实际读数就“一目了然”啦！vx/cX$__

一个题外插曲：表明ELISA试剂内在质量的一个重要统计标志，就是要看：阴性样本的的上限不应当大于、必须

小于C.O.I.=1.00；反之，阳性样本的的下限不可小于、应当大于C.O.I.=1.00