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体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则

酶联免疫诊断试剂生产及质量控制技术指导原则

酶联免疫诊断试剂是指在酶标板上包被相关的抗原（或抗体）

后，利用直接或间接的方法与待测样品中的相关抗体（或抗原）反

应，形成的抗原抗体复合物再与相应的酶标记的抗体和/或抗原进一

步反应，经过酶催化底物发生显色反应，由形成的颜色的强弱来判

断样本中相应的抗体或抗原的存在。

为了规范酶联免疫诊断试剂的生产和质量控制，制定本技术指

导原则。

本指导原则适用于应用酶联免疫法的第三类诊断试剂（病原微

生物）的生产和质量控制，其他类酶联免疫诊断试剂（如第二类等）

参考本指导原则执行。国家药品监督管理部门将依据科学技术发展

的需要，适时组织修订。

一、基本原则

（一）酶联免疫诊断试剂生产用的各种原料、辅料等应制定其相

应的质量标准，并应符合有关法规的要求。

（二）酶联免疫诊断试剂的生产企业应具备相应的专业技术人

员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；

同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相

应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还

《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》

的考核。企业应对试剂的使用范围作出明确规定，并经国家药品管理

部门批准。

（三）酶联免疫诊断试剂在研制时，应当遵循科学、规范的原则，

各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。

（四）酶联免疫诊断试剂生产过程中所用的各种材料及工艺，应

充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。

（五）生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳

定、工艺可控、检测有效。

二、原材料质量控制

（一）主要生物原料

与诊断试剂的质量最密切相关的生物原料主要包括各种生物活

性抗原、重组抗原、单克隆杭体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等

生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶（辣根过氧

化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反应用抗原或抗体、制备校准品（标

准品）等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以

保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工

艺必须相对稳定；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供

应商，如果主要原料（包括工艺）或其供应商有变更，应依据国家相

关法规的要求进行变更申请。

主要生物原料的常规检验项目一般包括：

1．外观

或摇不散的沉淀或颗粒；或者为白色粉末，不含有其他颜色的杂质；

特殊生物原料应具备相应外观标准。

2．纯度和分子量

主要经SDS电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，也可用其

他适宜的方法，如高效液相法等。根据所检测生物原料的分子量选择

适宜丙烯酸胺凝胶浓度进行电泳。一般情况下，每个电泳道加样量为

，同时用已知分子量的蛋白标准品作参照，采用合适的电泳电流，

电压和电泳时间；电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。

染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量，纯度应达到相

应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位置。

3．蛋白浓度

蛋白浓度可通过Lowry法、280nm光吸收法、双缩脲方法等进行

检测。

4．效价

效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。

效价应达到规定的要求。

5．功能性实验

功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考

查使用该原料的试剂的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较其与上批

次原料的相关性。

（二）生物辅料

原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。这

些生物原料均应按照《中国生物制品主要原辅材料质控标准（

年版）》所规定的质量标准要求进行检验，达到相应的质量标准后方

应用于生产。

建议作以下检验：

1.牛血清或羊血清

外观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体，无溶血或异物

无菌试验：将血清直接放37度培养7天，放在明亮处观察，不得

出现混浊。

总蛋白含量：用双缩脲方法来测定，标准为不小于32mg/ml。

球蛋白含量：取待测血清1ml，加入0.85%的NaCl溶液。加入

饱和硫酸铵1ml，置4℃