竹叶中黄酮的测定（征求意见稿）.docx

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T/BSGC0xx-2024

竹叶中黄酮的测定

1范围

本文件规定了竹叶中黄酮类化合物总量的分光光度法检测方法。本标准适用于竹叶中黄酮类化合物总量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件，仅该日期的文件对应版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3方法原理

在碱性条件下，黄酮类化合物苯与铝盐进行络合反应，生成黄色络合物，在420nm波长下测定其吸光度，在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比，与芦丁标准品比较，进行待测物中总黄酮的定量测定。

4试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

4.1硝酸铝[Al(NO3)3·9H2O]。

4.2硝酸铝溶液（100g/L）：称取Al(NO3)3·9H2O17.6g加水溶解，定容于100mL容量瓶中。

4.3醋酸钾（CH3COOK）。

4.4醋酸钾溶液（98g/L）：称取醋酸钾9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中。

4.5芦丁标准品，CAS号153-18-4。

4.6芦丁标准溶液

4.6.1芦丁标准储备液（1mg/mL）：精确称取经干燥（120℃减压干燥）至恒重的芦丁标准品50mg，使用无水乙醇溶解并定容于50mL容量瓶中。

4.6.2芦丁标准使用液（0.2mg/mL）：吸取芦丁标准储备液（4.6.1）10mL，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀。

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T/BSGC001-2022

4.7无水乙醇（C2H5OH）。

4.830%乙醇（无水乙醇与蒸馏水按3：7比例配制）。

5仪器设备

5.1分光光度计，采用1cm比色皿。

5.2分析天平，感量为0.01g和0.0001g。

5.3捣碎机

5.4超声清洗仪

5.5离心机

6试样制备与保存

6.1试样制备

将样品放入捣碎机中进行粉碎，粉碎后样品过40目筛，混合均匀。6.2试样保存

制样操作过程应防止样品收到污染。

7测定步骤

7.1样品处理

7.1.1鲜竹叶前处理

取新鲜竹叶50g洗净、烘干、切碎置于烧杯中加蒸馏水煮沸3h。冷却后进行粗滤对滤渣再浸取2次将3次滤液合并滤液用高速离心机分离15min2500r／min。然后进行加热浓缩（加热温度在80℃左右）浓缩冷却后加入等体积95％乙醇放入冰箱内2h。用高速离心机进行分离15min2500r/min。过滤得滤液滤渣弃去滤渣。对滤液进行蒸发浓缩（加热温度在80℃左右）待乙醇蒸发完后将浓液置于真空干燥箱中干燥成疏松固体粉碎得终产物。

精确称取0.1g（精确到1mg）置于100mL比色管，加入约50mL60%乙醇溶液充分摇匀样品，将摇匀样品置于超声清洗器中超声溶解30min，其间每5min摇匀溶液一次，待试验完全溶解，定容，待测。

7.1.2干竹叶前处理

方法一：精密称取竹叶粉末2g置于索氏提取器中，用80%乙醇水浴回流提取两次，每次提取时间2h，提尽黄酮。另用少量80%乙醇多次洗涤竹叶，并入提取液中，定量转移入100mL容量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，即得测总黄酮之淡竹叶样品液。将测总黄酮之样品液精密吸取适量于10mL容量瓶中定容。照标准曲线制备项下方法操作，测定

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T/BSGC0xx-2024

吸收度，由回归方程求出稀释液中总黄酮浓度。

方法二：精密称取竹叶粉末2g置于100mL圆底烧瓶中，用80%乙醇回流提取两次，将此烧瓶放入MCL-3型连续微波反应器中，调整功率560W、500W、400W、350W，反应时间20min，提尽黄酮。另用少量80%乙醇多次洗涤淡竹叶，并入提取液中，定量转移入100mL容量瓶中，加80%乙醇定容，摇匀，即得测总黄酮之竹叶样品液。将测总黄酮之样品液精密吸取1.5mL于10mL容量瓶中定容，照标准曲线制备项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出稀释液中总黄酮浓度。

7.2标准曲线绘制

7.2.1吸取芦丁标准使用液（4.6.2）1mL，2mL，3mL，4mL，5mL分别置于50mL容量瓶中。

7.2.2加无水乙醇至总体积为15mL，依次加入硝酸铝溶液1mL，醋酸钾溶液1mL，摇匀，加水至刻度，摇匀。静置1h。

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