手性色谱分析.ppt

*最常用的多糖型手性色谱柱（Daicel，大赛璐）淀粉柱：ChiralpakAD、ChiralpakAS、纤维素柱：ChiralcelOD、ChiralcelOJ第31页,共50页，2024年2月25日，星期天*CHIRALPAKAD系列直链淀粉-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；用于分离胺类、酯类化合物CHIRALPAKAS系列直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；适合于分离β-内酰胺类、环氧化物、酸类、杂环类化合物化合物。CHIRALCELOD系列纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；适用于分离β-受体阻滞剂、具有相同功能的化合物、类固醇类化合物，如：阿普罗尔、美托洛尔、氧烯洛尔。（芳氧丙醇胺类）CHIRALCELOJ系列纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]衍生物；被用于分离布洛芬、氯胺酮等药物，以及在手性中心含有一个大的取代基的化合物第32页,共50页，2024年2月25日，星期天*ChiralcelOD固定相分离美托洛尔对映体第33页,共50页，2024年2月25日，星期天*Chiralcel?OD-H手性色谱柱（4.6mm×250mm），流动相为正己烷－异丙醇－二乙胺（65∶35∶0.1）；流速为0.5ml/min；紫外检测波长为259nm；柱温为25℃；进样体积为20μl。第34页,共50页，2024年2月25日，星期天*环糊精类（包容色谱）D-葡萄糖单元通过α-1,4-糖苷键连接的环状分子结构，其疏水性内腔的包容作用和腔外上的羟基与药物对映体的氢键作用是手性识别的基础。有α、β、γ三种类型，其中β环糊精及其衍生物应用范围最为广泛。第35页,共50页，2024年2月25日，星期天*环糊精手性固定相改性环糊精键合固定相机械强度差、不能在高压下使用，用氨基、氨基甲酸酯等改性，形成疏水相互作用或π-π相互作用、偶极－偶极叠合作用，扩大了手性拆分的能力，又称多模式手性固定相（multimodalCSP，MMCSP）。第36页,共50页，2024年2月25日，星期天*手性流动相添加法（CMPA）将手性试剂加到流动相中，利用下面两种方式实现拆分：①流动相中手性试剂与对映体形成非对映体配合物，在固定相中的保留时间和分配不同而得到拆分；②手性试剂吸附在柱上形成动态的手性固定相，对映异构体与之作用不同而得到拆分。第37页,共50页，2024年2月25日，星期天*环糊精手性固定相与流动相流动相添加环糊精法拆分时，与流动相中环糊精包合越好的对映体，随流动相较快地被洗脱；环糊精固定相拆分时，与固定相中环糊精包合越好的对映体易被固定相所保留，较慢地被洗脱。以环糊精流动相分离对映体的洗脱顺序与环糊精固定相拆分的顺序刚好相反。第38页,共50页，2024年2月25日，星期天*影响分离的因素有机溶剂：用量越少，保留时间越长，但是过高，则环糊精溶解度降低，显著影响对映体的分离度。pH值酸度增大，有利于碱性药物的分离，对于酸性药物影响无规律性。第39页,共50页，2024年2月25日，星期天*分子结构（１）在其手性原子上均具有两个环状取代基或环内含有手性碳原子，而不能拆分的化合物在其手性碳原子上只含有一个环状取代基。（２）空间效应对手性识别的影响更为显著。（３）环糊精浓度增加有利于手性分离，但β-环糊精溶解度受限制。第40页,共50页，2024年2月25日，星期天*手性流动相HPLC法拆分萘普生对映体优化的流动相添加剂：(a)L-脯氨酸、(b)β-环糊精（β-CD）、(e)羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）(c、d)甲基-β-环糊精（Me-β-CD）第41页,共50页，2024年2月25日，星期天*流动相体系：乙醇∶水相（不同手性添加剂，1%三乙胺水溶液，pH为4.4）；HP-β-CD比甲基-β-CD拆分效果好第42页,共50页，2024年2月25日，星期天*色谱分离和前处理条件优化有机相对拆分的影响（1）相比于乙腈，乙醇可以使保留时间缩短；（2）随着乙醇体积分数的逐渐增大，其容量因子呈逐步减小的趋势，分离因子和分离度也减小。流动相中HP-β-CD浓度的优化（1）随着HP-β-CD浓度的提高，容量因子迅速降低、分离因子增大。（2）过高时分离因子变化不大，使该条件下的流动相变浑浊。第43页,共50页，2024年2月25日，星期天*流动相pH值的优化三乙胺含量的优化柱温的优化最佳色谱分离条件为：