微生物快速检测方法.ppt

感谢大家观看第31页,共31页，2024年2月25日，星期天**关于微生物快速检测方法常见微生物检测项目常规微生物项目细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌及酵母菌致病微生物项目沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157：H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单胞菌等第2页,共31页，2024年2月25日，星期天传统计数改良法1、培养膜法2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测快速检测的新方法1、ATP生物荧光法2、电阻抗法3、颜色变化4、流式细胞技术及激光扫描技术5、其它：热量法，放射测量法常规微生物检测方法第3页,共31页，2024年2月25日，星期天培养膜法_快速检测纸片技术原理二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。操作方法：检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成20cm2圆圈→37℃培养24h→计数(显色的斑点)第4页,共31页，2024年2月25日，星期天培养膜法_快速检测纸片技术优点：可节约玻璃仪器、培养基。可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的时间、人力和费用。因为有显色剂和小方格，计数方便。节约稀释的繁琐动作。可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。缺点成本比传统方法要稍高些。测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养时间。第5页,共31页，2024年2月25日，星期天培养膜法_快速检测纸片技术应用细菌总数测试片中含有一种红色指示染剂，使所有菌落易认别计数。大肠菌群测试片中含有指示剂，使菌落为红色，且有气泡产生。大肠杆菌指示剂可使所有菌落为红色，并可留住大肠杆菌产生的气泡。24小时可确定大肠杆菌数。第6页,共31页，2024年2月25日，星期天霉菌和酵母菌计数测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。金黄色葡萄球菌使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌，26小时可确认结果。培养膜法_快速检测纸片技术第7页,共31页，2024年2月25日，星期天螺旋平板法DWS螺旋平板接种仪自动菌落计数仪第8页,共31页，2024年2月25日，星期天原理样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细菌浓度。螺旋平板法第9页,共31页，2024年2月25日，星期天平皿旋转接种针往外移动同时自动将样品稀释1000倍阿基米德螺旋型轨迹螺旋平板法第10页,共31页，2024年2月25日，星期天优点与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。缺点检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。螺旋平板法第11页,共31页，2024年2月25日，星期天滤膜法滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。优点灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。缺点需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜；如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染，尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果汁，桶装饮用水等。第12页,共31页，2024年2月25日，星期天ATP生物荧光法原理ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+CO2+氧化萤光素+光应用用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。用于水质检测。改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。第13页,共31页，2024年2月25日，星期天10秒获得结果涂抹采样混合:震荡5s检测表面清洁度/水质检测ATP生物荧光法第14页,共31页，2024年2月25日，星期天ATP法检测成品的优缺点优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。ATP生物荧光法第15页,共31页，2024年2月25日，星期天电阻抗法测定细菌总数原理供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变化进行检测。阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离