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微生物检验常见问题解答

微生物检验常见问题解答

一、方法验证

1.做过验证的样品微生物检验方法是否都需要按照新的方法进行

重新验证?

答：对于微生物限度检查的产品而言，由于培养时间调整，应重

新进行验证。对于无菌检查的产品而言，如果方法未作实质性调整，

可以不必重新验证。个别产品在各论中收载了新的无菌检查方法，

对这些品种，应对收载方法的适用性进行验证。

2.以前做过无菌验证的品种是否需要重新按照新的标准再验证?

答：参见问题1。

3.“新增抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜”比如注射用

克林霉素磷酸酯属于抗生素，是否需要重新选取滤膜再验证?

答：目前采用的方法如果经验证表明可行，则可以继续使用该方

法。

4.微生物方法学验证时，培养时间是否跟样品日常检验所培养时

间一致?

答：应该一致。

5.微生物限度验证时，如果一个方法只有金葡回收率达不到要求，

该方法时是否可以用来做细菌霉菌的检测方法?

答：按药典的规定，一个计数方法通过验证，是指所有试验菌的

回收率均达到要求。如果采用各种方法以及方法的组合仍无法使金

葡回收率达标，则可以采用使金葡回收率最高的方法作为计数方法。

6.薄膜过滤的冲洗量不能超过1000ml，我公司的喹诺酮类产品

原来的方法是每张膜冲洗量为1500和2000ml，请问有没有合适的

方法将冲洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合规定?

答：有几种办法可以降低冲洗剂的用量：1)降低接触滤膜的供试

品的浓度;2)改进冲洗的方式，如少量多次地冲洗、降低蠕动泵的转

速等;3)添加中和剂，如高价金属离子。

7.微生物限度检查法规定，技术方法验证时，采用上述方法若还

存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收率最接

近要求的方法和试验条件进行供试品检验。请问，上述方法是指仅

通过一种方法还是一定要通过几种方法联用的?

答：应该要把可能采用的所有方法包括方法联用都进行验证。

8.供试品不溶于稀释剂，同时又有抑菌性，限度检查时应如何消

除抑菌性?

答：采用低速离心的方式，尽可能把供试品去除干净，取离心后

的上层液，进行薄膜过滤。

9.不溶于水的固体产品，加表面活性剂后，如何操作才能在方法

验证中得到较好的回收率?

答：同问题8。

10.有些品种2010年药典与2005年比较检验方法变了，是否需

要验证或确认?

答：同问题1。

、菌种管理

1.浓菌液的有效期该如何确定?

答：药典没有规定。可以通过实验确定有效期。例如，在不同的

时间点测定浓菌液的浓度，从而判断其有效期。

2.药典要求菌液在制备后2小时内使用，若保存在2-8℃的菌悬

液可在在24小时内使用，那我们在做验证或阳性对照是要加一定量

的菌就没有时间进行平板计数了，该如何确保所加菌量准确?

答：药典对稀释菌液的使用期限作出规定，并不会影响操作过程

中稀释菌液的加入。即便不规定，也无法在准确知道菌液浓度的情

况下加入试验菌。菌液稀释的实验操作和加入菌液的实验操作应该

是在同一次实验中完成的，要使加入的菌量符合药典的规定，可以

从浓菌液的制备方法、菌液稀释的方法等方面进行规范，也可以引

入浊度比较的方法。

3.菌悬液能否在倒平板之前确定菌含量?

答：活菌含量是无法确定的。总菌量可以通过比浊的方式确定。

4.具体从哪些方面进行菌种菌株的特性和纯度确认?如何操作?

答：基层的微生物实验室进行菌种纯度确认可以考虑以下一些方

面：1)形态学鉴定，包括菌落形态和染色形态;2)生化鉴定，可以考

虑使用API鉴定系统。

5.黑曲霉冻干菌种如何转种，传代?

答：与其他菌种一样，所不同的是使用的培养基应改为改良马丁

琼脂培养基。

6.干粉状的是否可做第0代使用?

答：只要是菌种保藏机构提供的冻干保藏的菌种，可以确定为第

0代。

7.菌种每次传代都要做纯度、特性等的确认吗?

答：从外部购入的菌种，在进入本实验室的菌种保藏体系时，需

要进行纯度和特性的确认。以后的每次传代，可以通过显色培养基

做简单的确认即可。

8.如采用低温保存菌种，需购买哪些设备?能够到省所进行实际

操作培训?

答：低温冰箱，应能够提供-70℃的低温。可以到省所来培训。

9.做方法验证时，工作用菌