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酵母提取物对小鼠肝损伤保护作用试验方案

酵母提取物抗氧化能力的测定

概述：

自由基是指是机体代谢的正常产物，在体内有很强的氧化反应能力，可以在细胞代谢的

过程中不断地产生。大量的研究结果证明，自由基是衰老的决定因素。

在生命活动过程中产生的各种自由基中轻自由基的作用最强，进攻性也最强，几乎可以

和所有的生物分子、有机物或无机物发生不同类型的化学反应。超氧阴离子不仅自身具有毒

性，而且可以通过其他反应产生更多的氧自由基，进一步对生物体产生损伤作用。

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试验拟采用DPPH自由基体系、超氧阴离子(O)自由基体系、羟自由基(HO)体系以及还

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原力测定体系评价酵母提取物的抗氧化活性。

试验方法

1）DPPH自由基清除试验

DPPH储备液配制：精密称取19.7mgDPPH溶解于25mL甲醇中，再吸取2.5mL溶液，

以甲醇补足体积至25mL，得到200µMDPPH母液，暗处保存备用。

药品及对照品储备液配制：酵母提取物采用甲醇溶解，得到终浓度为1mM的母液。再

将母液加甲醇稀释至一定浓度梯度，加3mL于比色管中（对照组加入3mL甲醇或水），再

加入1mLDPPH母液，剧烈震荡后，与暗处保存30min，以甲醇做空白，测其517nm吸光

值。以Vc作为阳性对照，各组反应平行测定三次，DPPH自由基清除率按照下面公式计算：

DPPH自由基清除率（%）=A0−A1×100

A0

式中A代表对照组的吸光值；

0

A代表加药组的吸光值。

1

2）超氧阴离子(O-)自由基清除试验

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采用NADH-PMS方法评估酵母提取物对超氧阴离子自由基的清除能力。试管中依次加

入1mLNBT(81µM)溶液，1mLNADH(468µM)溶液，1mL不同浓度的待测溶液，0.4mLPMS

(88µM)溶液，充分混匀，静置5min，在560nm处测其吸光值。用水代替待测溶液做阴性对

照，水代替PMS做本底组对照，Vc做阳性对照。清除率计算:

清除率(%)=[1-((A-A)/A]X100%

ab0

式中A为样品吸光值，A为样品吸光值，A为阴性对照值。

ab0

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3）羟自由基(HO)清除试验

本实验参照文献等提供的方法评估PEP对羟自由基的清除能力。反应液的配制:100mL

的磷酸盐缓冲液(20mMpH7.4)中加入EDTA,FeC13和DR(终浓度分别为0.1mM,0.1mM和

2.8mM)。测定时，取反应液1.5mL，依次加入0.1mLVC(1mM)、0.35mLHO(20mM)及1

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mL不同浓度的样品溶液，37℃水浴。20min后，加入1mLTBA(1%)和3mLTCA(2.8%)，90℃

水浴，15min后，532nm处测定吸光值。D-Mannitol做阳性对照。清除率的计算:

清除率(%)=[1-((A-A)/A]X100%