免疫胶体金技术.ppt

1.Pipette1mlofcolloidintoeachofaseriesof3mlcleanplastictubes.2.Adjusttheantibody(0.1ug/ul)totheproperpHwith100nMK2CO3or100mMHC1.3.Addtheantibodytoeachtubeinaseriesfrom0-150ul(ie0-15uginstepsof0,1,2,3....15ug).4.Shakeeachtubeandleaveforapproximately5minutestoconjugate.6.Toeachtubeadd100ulof10%NaC1andagitatefor1minute.7.TheTubecontainingtheminimumamountofproteinrequiredtostabilizethegoldsolisindicatedbytheoneinwhichthecolorofthegoldsoldoesnotchangefromredtoblueupontheadditionofNaCl.第21页,共33页，2024年2月25日，星期天Finalconjugation(IgG)Take100mlofgoldsolandadjusttoPh9Adjustthedialyzedandcentrifugedantibodysolution(0.1ug/ul)topH9.2AddthedeterminedamountofantibodysolutiondropwisetothegoldwhilestirringrapidlyAfter5minutesadd10mloffiltered10%BSAatpH9andstirgentlyfor10minutes.第22页,共33页，2024年2月25日，星期天PurificationThegoldconjugatemustbepurifiedfromexcessantibodyandanysmallclustersremovedbeforeconcentratingandstoring.Spinthegoldconjugateatspeedsaccordingtogoldparticlesize.Thegoldconjugatewillformalooseprecipitateatthebottomofthetube.Discardtheclearsupernatantandresuspendthepelletwithproperbuffer.Thegoldconjugate,ifcorrectlymade,willbestableat4℃forseveralmonths.Iflongtermstorageisrequiredisshouldbealiquotedinto1mlvolumesand20%glyceroladded.Itmaythenbefrozenandkeptat-20℃foryears.第23页,共33页，2024年2月25日，星期天胶体金免疫层析法试剂的组成第24页,共33页，2024年2月25日，星期天样品垫(Samplepad)：玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。样品垫的作用：减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布；去除样品中杂质颗粒；调节样品液pH值或粘度等。样本垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。第25页,共33页，2024年2月25日，星期天结合垫(Conjugatepad)：玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。结合垫的作用主要为：-吸附一定量的金标结合物颗粒；-吸附并持续不断的将