分子生物学实验手册-高校教材.pdf

生物工程与技术基础实验与工程实训中心 分子生物学实验室 实验一 氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验二 细菌质粒DNA的提取 实验三 琼脂糖凝胶电泳 实验四 细菌基因组DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳 实验五 质粒DNA 限制性内切酶实验 实验六 聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因 实验七 胶回收法纯化DNA 与琼脂糖凝胶电泳 南京工业大学制药与生命科学学院 《分子生物学实验》教学大纲 英文名称： Molecular biology 学分：1 学时：32 教学对象：生物工程专业、制药工程专业、药剂学专业、食品学专业、生物技术 专业 教学目的：在开设的理论课程的基础上，结合实验课程的教学，使学生能较全面 系统的掌握分子生物学的基本操作，拓宽专业知识面，加深对专业知识的理解， 强化动手能力。。 基本要求：了解分子生物学的实验操作原理，掌握有关实验仪器的使用方法。 实验内容： 实验一.细菌质粒DNA的提取及酶切实验 （8学时） 基本要求: 通过学习碱变性抽提法对大肠杆菌中的质粒的抽提，掌握质粒 DNA 的小量 制备方法，了解碱裂解法制备质粒 DNA 的原理。进一步了解限制性 内切酶的特性及酶切反应过程，掌握DNA的酶切技术。 重点: 掌握质粒DNA的小量制备方法，了解碱裂解法制备质粒DNA的原理。进一步 了解限制性内切酶的特性，掌握DNA的酶切技术。 难点: 掌握质粒DNA的小量制备方法及DNA的酶切技术。 实验二. 细菌基因组DNA的提取 （4学时） 基本要求: 了解细菌基因组DNA的提取的目的，原理，掌握细菌基因组DNA的提取的实 验步骤及操作方法 重点: 掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法 难点: 掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法 实验三. 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验（4学时） 基本要求: 了解大肠杆菌感受态细胞的制备原理及转化反应的目的，应用范围及操作过 程，掌握重组DNA质粒转化大肠杆菌的操作技术。 重点: 掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的操作技术 难点: 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验四. 聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因及琼脂糖凝胶电泳 （8学时） 基本要求: 熟悉聚合酶链反应（PCR）的基本原理、实验基本条件；了解 PCR反应条件 的优化和注意事项和应用范围 掌握聚合酶链反应（PCR）的实验技术：了解核 酸琼脂糖凝胶电泳的原理及操作步骤，掌握琼脂糖凝胶电泳的实验方法。 重点: 掌握掌握琼脂糖凝胶电泳的实验方法。 难点: 聚合酶链反应（PCR）的实验技术，琼脂糖凝胶电泳的实验方法。 实验五. 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS）分离蛋白质 （4学时） 基本要求: 了解聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS）分离蛋白质的基本原理，学会用该法 测定蛋白质分子量的操作技术。 重点: 掌握聚丙烯酰氨凝胶的配制方法，了解聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS）分 离蛋白质的基本步骤及实验结果的判定 难点: 聚丙烯酰氨凝胶电泳的实验步骤及实验结果的判定 实验一 氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验目的 掌握重组DNA质粒转化至大肠杆菌宿主的操作技术。 实验原理 带有外源DNA的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量 复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒 DNA,,