siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2(SMS2)基因对药物转运体的影响.pdfVIP

羔三蓄煮j黧峰三z…跚t．-aⅢ， 。。。 基因对药物转运体的影响 靳桂英 杨 青 (复旦大学生命科学学院生物化学系 上海200433) 【摘要】 目的 cancer 研究鞘磷脂合酶2(sphingomyelinsynthase2，sMS2)缺损对人结肠癌细胞(coloncell，caco2) 中药物转运体P_糖蛋白(P_glycoprotein，P_gp)及多药耐药相关蛋白2(multidrugresistance_associatedprotein2， MRP2)的表达与功能的影响。方法sMs2特异性siRNA转染至caco 2细胞。采用RT_PcR和reahimePcR检 测sMs2特异性siRNA的干扰效率；采用westem blot法检测siRNA转染后P_gp和MRP2蛋白表达的变化；采用 胞内蓄积试验，通过HPLc检测P_gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量，分析下调sMs2水 平对caco 2细胞中P_gp及MRP2功能的影响。结果 应用siRNA下调sMs2水平后，P_gp和MRP2的蛋白质水 平均显著下调；胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加，说明P_gp和MRP2的外排功能 减弱。结论sA侣2基因表达下调对caco 2细胞中P_gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响。 【关键词】siRNA干扰；鞘磷脂合酶2(sMs2)； P糖蛋白(Pgp)；多药耐药相关蛋白2(MRP2) 【中图分类号】 Q241 【文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn2014．05．001 Effectsofsphingomyelinsynthase2(SMS2)interefered by siRNAon inCaco一2cells drugtransporters YA ， q 隗 n蒌|肚 战 抛 ∞砘舭站 删 ．嘴般卯 w∞ №～m嗜魄 “|兰 鼢伽 咿 删 黜y厂 奶 办鲫 加∞弱 既明彩 【Abstract】 1b theeffectof on o协ectiVestudy sphingomyelinsynthase2(SMS2)defecttheexpression andfunctionofdrug and resistanceassociated2 transporters王)_glycoprotein(f’gp) multidrug protein (MRP2)inhumancolon MethodsSMS2 cancer(Caco_2)cells． specificsiRNAwastransfec