GB/T 14643.6-1993工业循环冷却水中铁细菌的测定　MPN法.pdf

中华人民共和国国家标准 工业循环冷却水中铁细菌的测定 MPN法GB/r14643.6-93 Industrialcirculatingcoolingwater-Examinationofironbacteria -MPNtest 1 主题内容与适用范围 本标准规定了工业循环冷却水中铁细菌的测定方法。 本标准适用于工业循环冷却水中铁细菌的测定，也适用于原水、生活用水及粘泥中的铁细菌的测 定。 2 引用标准 GB 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 本法采用多试管发酵技术，在29士1℃培养14d,如果试管内棕色消失而且形成褐色或黑色沉淀，表 明阳性反应，采用MPN技术，对被测试样中的铁细菌进行计数。 4 试剂和材料 本试验方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水规格的水。 4.1硫酸镁(GB671)。 4.2 硫酸钱(GB1396); 4.3 磷酸氢二钾(HG3-1228); 礴.4 氯化钙; 4.5 硝酸钠(GB636); 4.6 柠檬酸铁按; 4-7 氯化钠(GB1266); 4.8 氢氧化钠(GB629)溶液:46g/1-; 4.9 盐酸(GB622)溶液-1+11; 4.10 硫代硫酸钠(GB637); 4-11 乙醇(GB678)溶液:75%(v/v); 4.12 牛皮纸; 4.13 医学脱脂棉。 仪器和设备 无菌箱(室)或超净工作台; :; 蒸汽压力灭菌器; 国家技术监督局1993一08一06批准 1994一07一01实施 GB/T 14643.6一93 5.3 生化培养箱; 5.4 电热干燥箱:温度可控制在((60-280)120C; 5.5 刻度吸管;1mL; 5.6刻度吸管:5mL; 5了试管:150mmX15mm; 5.8 试管架; 5.9磨口三角瓶:100mL; 5.10 磨口试M瓶,1OOOML; 5.11 容量瓶;1OOOmL, 6 试验前准备 6.，培养基的制备 称取下列试剂: 硫酸镁 。.5g; 硫酸钱 0.5g; 硫酸氢二钾 。.5g; 氯化钙 0.29; 硝酸钠 。.5g; 柠檬酸铁按 10.0g, 将上述试剂溶解在1OOOML水中，用氢氧化钠溶液(4.8)或盐酸溶液(4.9)调节pH至6.8士。2, 并分装在试管中，每管5mL,塞上棉塞，数支一捆，每捆管口用牛皮纸包扎，用蒸汽压力灭菌器121士10C 灭菌15-in, 6，2 无菌稀释水的制备 6.2.1生理盐水的配制:称取8.50g氯化钠溶解在1OOOmL水中，混匀。 6.2.2 将生理盐水(6.2.1)分装在100mL磨口三角瓶中，每瓶45mL。每个三角瓶塞子和瓶口间插入 一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口用牛皮纸包扎以防污染，用燕汽压力灭菌器121士1℃灭菌15min, 63 刻度吸管的灭菌 6.3.1将洗净并烘干后的刻度吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10^-15mm，棉花不 宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。 6.3.2 每支刻度吸管用一条约40-50mrn宽的牛皮纸条，以45，左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端 在头部，粗端用多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于16。士 2C灭菌2h, 6.4 采样瓶的灭菌 将洗净并洪干后的1OOOmL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热千燥箱中，于160 士2C灭菌2ha 65 硫代硫酸钠灭菌 将硫代硫酸钠放入无菌箱(室)内，并均匀地摊在离紫外线灯30cm处，灭菌30min, 7 测定步骤 了1 水样的采集 7}1.1用无菌采样瓶采集被测样品，在采样过程中，要保护瓶口和颈部，防止这些部分受杂菌污染，瓶 内要留下足够的空间，以备测定之前摇匀。 7.1.2若采集的水中有余熟，应在采样前，在无菌操作下，于无菌采样瓶(6-4)中加人灭过菌的硫代硫