GB/T 14643.4-1993工业循环冷却水中土壤真菌的测定　平皿计数法.pdf

中华人 民共和 国国家标准 工业循环冷却水中土壤真菌的测定 GB/T 14643.4-93 平皿计数法 Industrialcirculatingcoolingwater-Examinationof soilfangi-Srandardofplatecount 1 主题内容与适用范围 本标准规定了工业循环冷却水中土壤真菌的测定方法。 本标准适用于工业循环冷却水中土壤真菌的测定，也适用于原水、生活用水及其他水中土壤真菌的 则定。 2 弓}用标准 GB 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 66R2 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 本标准采用土壤真菌培养基，用平皿计数技术，在29士1℃培养72h,测定工业循环冷却水中土壤真 菌的总数。 4 试剂和材料 本实验方法中除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水规格的水。 4.1马铃薯:市售新鲜(无芽)，去皮后切成约20mmX20mmX20mm小块; 4.2 葡萄糖(HG3-1094); 4-3 琼脂:生物试剂; 4.4 氯化钠(GB1266); 4.5 乳酸; 4-6 乙醇(GB678).75%(v/v)溶液; 4.7 硫代硫酸钠(GB637); 4.8 牛皮纸; 4.9 医用脱脂棉; 4.10 医用脱脂纱布。 5仪器和设备 5门 无菌箱(室)或超净工作台; 52 蒸汽压力灭菌器; 5.3 生化培养箱; 国家技术监督局1993一08一06批准 1994一07一01实施 GRIT 14643.4一93 5.4 鼓风电热千燥箱;温度可控制在(60-280)士20C; 5.5铝锅:0200mm; 5.6搪瓷量杯:1OOOmL; 5.? 磨口三角瓶:1OOOmL; 5.8 培养皿:090mm; 5.9 磨口试剂瓶:1OOOmL; 5.10 刻度吸管:1mL; 5.11刻度吸管:5mL; 512 :三角瓶:500mL, 6 试验前的准备 6.1 培养基的制备 称取约200g的马铃薯于铝锅中，加水约1OOOmL在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布 过滤到搪瓷量杯中，收集到约900ML建液，滤液搅匀待用。于上述滤液中加入20.Og琼脂和20.鲍葡萄 糖，并放在电炉上加热，不断地搅拌，待琼脂完全溶化后趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，用 热水补充至1OOOmL，并用乳酸调节pH至4.。士。.1，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其 总量的213,塞上棉塞，再用牛皮纸把瓶口包好，用燕汽压力灭菌器于121土1℃灭菌15mina 62 无菌稀释水的制备 6.2.1生理盐水的配制:称取8.5g抓化钠溶解在1OOOmL水中，混匀。 6.2.2将生理盐水((6.2.1)分装在1OOOmL磨口三角瓶中，每瓶45mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插人 一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用燕汽压力灭菌器于121士1℃灭菌 15min, 6.3 刻度吸管的灭菌 6.3.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10-15mm,棉花不宜露 在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。 6.3.2 每支刻度吸管用一条约40^-50mm宽的牛皮纸条，以45左“右角螺旋形卷起来，吸管的尖端在 头部，粗端用多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若千支捆成一束，置电热干燥箱中于160士2C 灭菌2h, 6.4 培养皿的灭菌 将洗净并烘干后的培养皿10个左右叠在一起，用牛皮纸卷成一简，置电热干操箱中于16。士2℃灭 菌2h, 65 采样瓶的灭菌 将洗净并洪于后的1000mL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热千燥箱中于160士 2C灭菌2h, 66 硫代硫酸钠的灭菌 将硫代硫酸钠放人无菌箱(室)内，并均匀地摊在离紫外线灯30c。处，灭菌30min 测定步骤 7.1 水样的采集 7.，.1用无菌采样瓶采集被测样品，在采样过程中要保护瓶口和瓶颈，防止这些部分受杂菌污染，