2020年新版徒手切片制作方法.docx

。 。 PAGE # 一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。 所需的仪器用具简单， 药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体 结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手 制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也 不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片） 、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒 杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。 1%番红水溶液（或 50%酒精 溶液）， 0.5%固绿 95%酒精溶液， 70%、85%、 95%酒精，纯酒精、二甲 苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、 叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成 宽约5?6毫米，长1?1.5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或 马铃薯块茎等 ）中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成 两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷 成筒状再切 、切片 盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住 材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2?3毫米， 材料的切面必须保持水平方向。 右手执刀 ( 剃头刀或刀片 )，平放在左手食指之上，刀口向内， 自左前方向右后方滑行切割， 要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损 伤材料或切得不平。 切片过程中， 如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时， 必须立 即削平。 刀片或剃刀必须锋利， 材料及切片均需经常沾水， 以保持材料湿 润、润滑。 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中， 以备观察; 等切到相当数量 后; 再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保 存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以 下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有 70%酒精的染色皿中进行固 定。固定时间为 16 分钟或更长时间。 4、染色、脱水、透明 (1)用吸水管吸去 70%酒精，染以 1%番红( 50%酒精溶液)约 30 分 钟。 (2)再用吸管吸去番红，换用70%^85%95%酉精进行冲洗、脱水， 每级酒精3?5分钟。 (3)复染色。吸去酒精，用 0.5%固绿(95%酉精溶液)进行复染色，时间为 0.5 分钟。 (4)冲洗、脱水。用 95%酒精冲洗 1次，时间 10秒。后移入纯酒精 中脱水 2? 3 次，每次 3? 5 分钟。 ( 5)透明。吸去纯酒精，放入 1/2 二甲苯— 1/2 纯酒精溶液中脱水 和透明 1次，时间 5分钟。 ( 6)吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明 2 次，时间 5 分钟。 5、封片、贴标签 将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上， 滴上中性树胶， 盖上盖玻片进行干燥。 在已封好的切片左边贴上标签， 注明材料名称、 制作日期和制作者姓 名等项，以便查考。 较好的切片， 其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色， 细胞质和纤维 素的壁则常被染成绿色， 红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。 现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下 : 选材-切片-固定（70%酉精）-1%番红（50%酉精溶液）染色-70%酉精 冲洗-脱水（85%酒精、95%酒精）-0.5%固绿（95%酒精溶液）复染色 -冲洗（95%酒精1次）-进一步脱水（纯酒精2?3次）-透明（1/2纯 酉精十 1/2 二甲苯及纯二甲苯各二次 ） -封片（中性树胶 ） -贴标签。 附：药品的简单配方 （1） 1%番红：于蒸馏水或 50%酉精 100 毫升中溶入番红粉末 l 克， 过滤后使用。 （2） 0.5%固绿：95%酉精 1 00毫升中加入固绿粉末 0.5 克。 徒手切片方法的改进 徒手切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久 , 在石蜡切 片之前, 基本上使用徒手切片。 它的优点在于可以观察新鲜材料组织 和细胞的天然色彩 , 看到活体细胞结构状态 , 所以徒手切片运用在 植 物学实验教学中比较普遍。 为了克服传统徒手切片技术中的不足 , 我 们进行了改进 , 改为皮套加刀片。 这种切片方法切片速度快 , 软硬质 材料都可以切 , 不需要任何夹物 , 既经济适用 , 又简单易行。 1 材料用品 双面刀片 1 个,直径 1?1.5 cm 的乳胶管, 毛笔、培养皿、载玻片、 盖玻片、吸水纸, 质量分数 1%的中性红染液或红墨水 ,新鲜的植物根、 茎、叶、花药和子房等。 2 切法 将直径1?1.5 cm的乳胶管剪成3.5 cm长的一段，用剪子从中间剖 开扣在右手的大拇指上 , 注意皮套一定要高于拇指