实验五 去垢剂对细胞影响等观察2009-3.pptVIP

实验五 去垢剂等对细胞膜影响的观察 一、实验目的 1、掌握细胞膜的组成、结构以及功能，初步了解水通道蛋白等研究热点。 2、了解去垢剂和渗透压等对细胞膜及细胞内外物质运输的影响。 3、了解分子量、分子极性等对细胞膜透性的影响。 二、实验原理 去垢剂能破坏细胞膜结构，造成细胞损伤、功能丧失，甚至引起死亡。非离子型去垢剂通过溶解膜上的脂蛋白和磷脂类化合物等，使细胞膜结构改变。 细胞膜具有对物质选择透过的生理功能。脂溶性越高通透性越大，水溶性越高通透性越小；非极性分子比极性容易透过，小分子比大分子容易透过。水分子可通过水通道进出细胞膜；非极性的小分子如O2、CO2、N2可以很快透过脂双层，不带电荷的极性小分子，如尿素、甘油等也可以透过人工脂双层，尽管速度较慢，分子量略大一点的葡萄糖、蔗糖则很难透过，而膜对带电荷的物质如：H+、Na+、K+、Cl—、HCO3—是高度不通透的。 成熟红细胞结构简单，细胞内没有细胞核，是研究细胞膜结构与功能的理想模型。血红蛋白外溢是判断红细胞膜通透性的标志。低渗溶液中，红细胞涨破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的溶液，此现象称为溶血。发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。 二、试剂和器材 材料： 1、四膜虫培养液 一种单细胞原生动物，主要产自淡水，一般呈倒卵形或梨形，具有两个细胞核。可在10倍镜下轻松地观察其细胞形态及运动等方面的变化。 2、脱纤维绵羊红细胞悬液 市售抗凝绵羊血1ml，用0.15mol/L NaCl 9ml洗涤3次，每次1000r/m离心5分钟，最后配成50%的红细胞悬液。 器材： 载玻片、盖玻片、显微镜 试剂： 本实验涉及试剂较多，且大多为无色透明液体。实验时请注意试剂瓶和小离心管表面的标签，以免搞错试剂！ 三、实验操作 如何判断溶血？ 判断是否发生溶血现象，可将一张画有黑线的白纸放在离心管后，观察溶液的透明程度： （1）离心管内液体分为明显两层，上层浅黄色透明，下层红色不透明（隔着离心管不能看见后面白纸上的黑线），结果为不溶血。镜检红细胞完好，呈双凹盘状。 （2）离心管内液体浑浊，上层红色，为不完全溶血。镜检有部分红细胞碎片。 （3）离心管内液体变红而透明（隔着离心管可清楚地看见后面白纸上的黑线），不分层，为完全溶血。镜检红细胞全部为碎片。 涂片后镜检观察现象 四、注意事项 1、四膜虫为淡水性原生生物，可承受一定的低渗压。实验时应选择培养约3天的四膜虫培养液，一则细胞数目较多，二则细胞比较新鲜。如培养时间过久，大部分细胞处于衰老期，细胞运动不明显。 2、加入去垢剂后四膜虫细胞发生变化非常快，需立即观察。非离子型去垢剂和离子型去垢剂对细胞膜作用的效果有所不同，可进行比较。 3、四膜虫的细胞比较大，可在低倍镜下观察其生理状态，但如没有经过固定染色，应将光线适当调暗，以方便观察。 4、判断是否发生溶血现象，可将一张画有黑线的白纸放在离心管后，观察溶液的透明程度，这样有个统一的标准。溶血发生一般以半小时为限。 5、因每离心管中加入红细胞悬液量较少，故即使不发生溶血，等待分层出现的时间也较长，此时间不需记录。 6、如要准确计时，最好准备秒表。 （二）细胞膜通透性的观察 按下面各表格记录实验现象并分析原因。 1、溶血现象观察及分析（举例） 2、醇中的溶血情况 4、去垢剂中的溶血情况 五、思考题 1、分析不同类型的醇透过细胞膜的速度不同的原因（按极性、分子大小等分析）。 2、能够理解渗透压、去垢剂对细胞形态功能上发生的作用和机制，并能够准确地描述所观察到的现象及给出合理的解释。 3．为什么溶液中微量的去垢剂可对活细胞产生严重的影响？ 4．绵羊红细胞和四膜虫都放在蒸馏水中，前者破裂溶血，后者却无影响，为什么？ 最后 请同学们在实验结束后把桌面整理好，使用过的离心管、盖玻片丢到垃圾桶里，载玻片洗净回收，登记好显微镜使用记录本，经助教检查后再离开! * * 从低等生物到高等生物，所有的细胞表面均有类似的一层膜状结构，即细胞膜。而真核细胞内的大部分细胞器的表面，也同样包被着膜状结构，称为细胞内膜。细胞膜和细胞内膜可总称为生物膜（biomembrane）。 生物膜的功能： （1）分隔形成细胞和细胞器，为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境； （2）屏障作用，膜两侧的水溶性物质不能自由通过； （3）选择性物质运输，伴随着能量的传递； （4）激素作用、酶促反应、细胞识别、电子传递等；