终版基因工程的基本操作步骤.ppt

* 最新. * 1、基因工程包括哪些步骤？ 3、基因工程中的核心环节是哪一步？ 4、基因表达载体导入到受体细胞有哪些方法？ 5、目的基因导入受体细胞就会成功表达吗？ 如何检测和鉴定？ 2、什么是目的基因？获取的方法有哪些方法？ 思考讨论问题： 最新. * 最新. * 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 最新. * 主要是指编码蛋白质的基因 (一）目的基因 　 目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。 一、目的基因的获取 最新. * （二）获取目的基因的方法 1、从基因文库中直接获取 2、PCR技术扩增 3、化学方法直接人工合成 最新. * 1、从基因文库中直接获取 （1）基因文库的概念 部分基因文库： 基因组DNA文库： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 含有一种生物的全部基因 只包含了一种生物的部分基因，如:cDNA文库 最新. * （2）基因文库的建立方法 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与运载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 方法一：直接分离法 最新. * 某种生物的单链mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与运载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 方法二：反转录法--cDNA的合成流程图解 最新. * PCR技术—多聚酶链式反应 PCR扩增仪 DNA半保留复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） 模板DNA 2、利用PCR技术扩增目的基因 原理： 前提： 条件： 最新. * 利用PCR技术扩增目的基因 最新. * 5’ 3’ G—G T—C 3’ 5’ A—G C—C 5’ 3’ 引物Ⅱ G—G 高温变性 低温退火 中温延伸 1.目的基因DNA受热变性，解链； 5’ 3’ A—G 引物Ⅰ 2.引物与单链互补结合； 3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。 最新. * 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 3、人工合成 最新. * —— 核心 二、基因表达载体的构建 功能：使目的基因进入受体细胞并有效表达，而且要能稳定存在且遗传给后代。 最新. * 基因表达载体的构建 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 最新. * 编码区 非编码区 非编码区 启动子 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质. 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 终止子 最新. * 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 A G G T C A C G T C G T C C A G T G C A G C RNA聚合酶 A G G U C A C G U C G 最新. * 基因表达载体的组成： b、目的基因 a、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 最新. * 1、下列属于获取目的基因的方法的是 ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 小试牛刀 最新. * 2、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据右下图回答问题。 (1)此图表示的是采取__________合成基因的方法获取__________基因的过程。 (2) 图中①DNA是以为_________ _________ 模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的目的基因。 人工 目的 控制胰岛素合成的信使RNA 小试牛刀 最新. * (3) 图中③代表 　， 它往往