氨基酸的分离 纸层析法.ppt

生物化学实验 张积森 （ zjisen@) ? 生物化学 (Biochemistry) ：研究生命物质 的化学组成、结构及生命活动过程中各种 化学变化的基础生命科学 . ? 化学生物学（ Chemical Biology) ：利用化 学手段研究生物学问题或利用生物学手段 解决化学问题 . Introduction Biochemistry Chemistry Biology Genetics Molecular Biology Biotechnology Pharmacology Cellular Biology A Multidisciplinary Science 生物化学 实验 ? 介绍生物化学实验的原理和方法 ? 动手 ! 使用各种生物化学实验仪器，掌握生物化学 的各种基本实验方法和操作技能 ? 加深对生物化学理论知识的认识和理解。 What should we get ? 设计一个实验的基本思路，根据掌握的实 验基本原理，严密地组织自己的实验，合 理地安排实验步骤和时间－－去解决所需 要 解决的问题 。 生化实验四大 必杀技 ? 离心 ? 电泳 ? 层析 ? 光谱 What should we do ? 预习： ? 操作：安全 & 什么是动手能力强？ ? 记录： Raw Data ? 总结： 实验记录 ? 实验前预习，了解要学习的主要内容。 ? 实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、 编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、 试剂的浓度等。 ? 实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量 的数据。即使观测的数据相同或偏差很大，也都 应如实记录，不得涂改 实验报告 （ A4 大小纸 ， 计算成绩！ ) ? 实验目的 ? 实验原理 ? 仪器、材料和试剂 ? 实验步骤 ? 结果讨论（含数理据处） ? 注意事项 成绩 ? 考勤 ? 课堂表现 ? 实验报告 ? 笔试 ? 实际操作考试 实验一 氨基酸的分离鉴定 —— 纸层析法 【实验目的】 学习氨基酸纸层析法的基本原理 掌握氨基酸纸层析的操作技术 纸层析法 属于分配层析，它是以层析滤纸为 载体，以吸附于滤纸纤维羟基上的一层水（极性） 为固定相，流动相是有机溶剂，主要是正丁醇 （非极性溶剂）。分离氨基酸是根据不同氨基酸 的极性，在固定相和流动相中的 分配系数 不同而 进行分离的（依据相似相溶原理）。 【实验原理】 分配层析 : 利用混合物中各组分在两种不同溶剂中的分配系 数不同而使物质分离的方法。 分配系数 : 是指一种溶质在两种互不相溶的溶剂中的溶解达 到平衡时，该溶质在两种溶剂中所具有浓度之比。 不同的物质因其在各种溶剂中的溶解度不同，因 而也就有不同的分配系数。 。 氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是用 Rf 值 ( 比 移值 ) 来表示的。 在一定的条件下某种物质的 Rf 值是常数。 Rf 值的大小 与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析 温度等因素有关。 【实验器材与试剂】 1 、层析缸 2 、毛细管 3 、喉头喷雾器 4 、培养皿 5 、层析滤纸 6 、铅笔（直尺） 7 、分液漏斗 8 、吹风机 9 、 正丁醇 10 、冰醋酸 11 、氨基酸标准样品 12 、氨基酸混合样品 13 、 0.1% 水合茚三 酮正丁醇溶液 【实验步骤】 1 、配扩展剂： 正丁醇：冰醋酸：水 = 20ml ： 5ml ： 15ml 顺序：正丁醇 → 冰醋酸 → 水，放入分液漏 斗中，充分混匀。静置约 10min 后分层，放 出下层水层，其余的倒入培养皿中。 2. 准备滤纸 取一张层析滤纸，距纸底边 2cm 处用 铅笔划一横线，沿线每隔 2.5cm 作一记 号为点样处，点样处也不要太靠近两侧 边（约距 1.5cm ），会产生边缘效应。 3. 点样 （顺纸纹方向） 用毛细管依次吸取标准品氨基酸和 混合样，吸管与滤纸垂直，轻轻接触纸 面，样品扩散直径小于 3mm 。一滴滴完 后用 冷风 ( 低温） 吹干，再点第二次， 共点三次。 4. 扩展 将点