不同浓度1,6二磷酸果糖对IL1β损伤的乳鼠胰岛细胞功能.docx

收稿日期 :2004-03-11 修回日期 :2004-06-14 基金项目 :四川省教育厅青年基金 (2002B14 文章编号 :1001-6325(200502-0183-02 研究短文 不同浓度 1,6-二磷酸果糖对 IL- 1β损伤的乳鼠胰岛细胞功能的影响 郑 倩 1,方海立 2,张能 2,曹弟勇 3,康 健 4,敬华娥 1 (1.川北医学院生理教研室 ,四川南充 637007;2.重庆医科大学生理教研室 ,四川重 庆 400016 川北医学院 ;3.药理教研室 ;4.解剖教研室 ,四川南充 637007 中图分类号 :R587 文献标识码 :A 1,6-二磷酸果糖 (Fructose-1,6-Disphosphate ,FDP 能在分子水平上调节细胞代谢中若干酶活性 ,恢复和改善细胞代谢 ,对多种组织细胞有明显的保护功能。本实验室已报道 5~10mmol /L FDP 对白介素 -1β(IL-1β损伤的胰岛有保护作用 [1], 但是笔者也发现低浓度和高浓度的 FDP 不具相同作用。提示应用 FDP 需注意剂量对其效应的影响。 材料和方法 1.1 胰岛细胞分离与培养 : 出生 1~3d 的 Wistar 大鼠 20 只,无菌取出胰腺 ,清洗 ,剪碎 ,V 型胶原酶溶液消 化 ,Hanks 液终止消化 ,清洗离心 ,加入含 15%小牛血清的 RPMI-1640 培养液 ,制成细胞悬液 ,调节细胞浓度至 1×109L -1,置 96 孔板培养。随机分为 :正常对照组、 IL- 1β 损伤组、 IL- 1β+FDP组,每组 6 孔。正常对照组以培养液培养 ,其余各组加入 20U /mL 的 IL- 1β作用 20h 后, 于保护组中分别加入不同浓度的 FDP 继续培养 30h 进行各项检测。 1.2 细胞活性检测 :用 MTT 法。 1.3 胰岛素分泌量测定 :用放免法检测胰岛素的基础分泌量和高糖刺激胰岛素分 泌量。 1.4 细胞培养液中 NO 含量和 NOS 活性的检测 : 用 NO 和 NOS 试剂盒检测。 1.5[Ca 2+]i 测定 : Fura-2 荧光检测技术。 2 统计学方法 结果以均数 ±标准差 (x — ±s 表示 ,采用方差分析。 SAS 软件处理完成。 结果 3.1 不同浓度 FDP 对 IL- 1β损伤胰岛细胞活性影响 : 表 1 损伤组与正常对照组比较光密度值 (A 值明显降低 (P <0.01,表明细胞活性下降 ;FDP 组与损伤组比较 A 值改变无明显变化。 3.2 胰岛素分泌量测定 IL- 1β作用后胰岛细胞 : 基础分泌胰岛素量和高糖刺激分泌量显著下降 (P <0.01,而低、高浓度 FDP 组 未见明显变化。 3.3 细胞上清液中 NOS 和 NO 2-/NO 3- 的测定 : 损伤组与正常对照组比较可见细胞上清液中 NOS 活性与 NO 2-/NO 3- 含 量均明显升高 (P <0.01,与 FDP 作用后 ,NOS 的活性和 NO 2-/NO 3- 的含量无明显变化 (表 1。3.4 细胞内钙离子浓度的变化 :FDP 加入 IL- 1β作用后的胰岛细胞 ,与损伤组比较细胞内 [Ca 2+]i 明显降低 (P <0.01(表 1 。表 1 不同浓度 FDP 对 IL- 1β损伤细胞活性、基础胰岛素分泌量和葡萄糖刺激胰岛素分泌量、 NOS 活性、 NO 2-/NO 3- 含量及细胞内钙离子浓度的影响 Table 1 Effects of different concentrations of FDP on cell viability ,basal and glucose-stimulated insulin levels ,NOS activity , NO 2-/NO 3-content and [Ca 2+]i in supernatent in islets (x — ±s ,n =6groups FDP mmol /L A velue basic insulin level μU /mL glucose stimulated insulin level U /mL NOSμU /mL NO 2-/NO 3- μ mol /L [Ca 2+]i control -0.25 0.020425±.67 16±.85204.50 10±.788.69 0±.7384.67 10±.2373.42 1±.79IL- 1β group - 0.12 ±0.012*237.00 22±.21*90.17 6±.11*19.92 1±.56*457.64 19±.29*328.50 26±.28*IL- 1β +FDP110.13± 0.008230.83 ± 11.5896