who第五版精子形态解读.ppt

5th-WHO手册精液参考值下限 参数 参考值下限 精液体积（ml） 1.5（1.4-1.7） 精子总数（106 / 次射精） 39（33-46） 精子浓度（106/ml） 15（12-16） 总活动率（PR+NP，%） 40（38-42） 前向活动率（PR，%） 32（31-34） 存活率（存活精子，%） 58（55-63） 精子形态学（正常形态，%） 4（3.0-4.0） 其他参数 pH ≥7.2 过氧化物酶阳性白细胞（106/ml） <1.0 MAR试验（附着粒上的活动精子，%） <50 免疫珠试验（附着珠上的活动精子，%） <50 精浆锌（μmol/射精） ≥2.4 精浆果糖（μmol/射精） ≥13 精浆中性葡糖苷酶（mU/射精） ≥20 精子形态学评估 正常形态精子百分率与受精率相关 异常形态精子的类型、部位和程度更重要 WHO第五版手册中精液参考值的来源 12个月内使女方妊娠的男性精液参数 400～1900份精液标本（来自3大洲，8个国家） 单侧参考范围，第5 百分位数作为下限 任何精液参数的高值都不能判断生育力 《WHO人精液实验室检查及处理手册》（第5版）精子形态学部分解读 浙江省人类精子库 姚康寿 主任医师 背景 全球精液检测标准化的需求，WHO制定了人类精液实验室操作手册，用于临床实验室和科研。 第一版 1980年 第二版 1987年 第三版 1992年 第四版 1999年 第五版 2010年 WHO1 1980 WHO2 1987 WHO3 1992 WHO4 1999 WHO5 2010 中文翻译本 标准方法 可选择试验 研究性试验 精子制备 精子冷冻 精液分析 精子制备 质量保证 WHO 5th主要内容 附录 正常形态精子： 通过观察来自女性生殖道，特别是经性交后宫颈粘液或从卵子透明带表面回收的精子有助于定义具备潜在受精能力的精子。 使用这些标准，对所有男性而言，其正常形态精子百分率的范围大致为0-30%，很少超过25% 。 这个低数据自然产生一个低的临界值 （仅为3-5%）。 经过“透明带选择”的精子，正常形态率仍然低，约8-25%。 WHO不同版本精子形态学内容比较 精子形态学分析包括以下步骤 精液涂片的制备 固定和染色 封片 精子形态评估（应制备双份涂片重复评估，每张涂片应评估至少200个精子） 。 双份片评估（百分率）结果比较（差异是否在可接受范围内，如果不可接受，重新读片） 。 取平均值，报告结果 精液涂片的制备 充分混匀精液样本。 快速取样，避免精子从混悬的精液样本中沉降。 重复取样前，再次混匀精液样本。 根据精液样本具体不同情况，采用不同的涂片方式。 （a） 对于未稀释的精液，采用拉薄技术，将一滴精液（S）沿成角的载玻片背侧边缘展开，向前拖拉制成涂片。 （b） 对于洗涤的精液，采用滴管法，水平持滴管（P）推进，将一滴精子悬液（SS），沿载玻片的表面展开。 正常精液标本 使用拉薄技术，取一滴精液在载玻片的表面上涂片。 磨砂载玻片的两面，用不起毛软纸擦干净。 用HB或No.2铅笔，在载玻片的磨砂处标记上身份编号、日期。 根据精子密度，取5-10μl的精液滴在载玻片的一端。用第二张载玻片作为拉片，沿着载玻片的表面拖拉精液滴。 涂片经空气干燥后，立即固定、染色。 一开始，可以用10μl的精液，45°角度，一秒钟的时间涂片。 为了减少涂片上精子间的相互重叠，如果需要，可以改变上述参数（10μl，45°，1秒）。 精液的粘稠度越低，涂片的拉薄技术发挥得越好，拉薄技术不适用于高度粘稠的精液。 拉薄技术 精子密度低的标本 假如精子密度低于2×106/ml，浓缩标本 粘稠精液标本 精浆高度粘稠时涂片往往是厚而不均，可以按与液化不良精液标本相同的处理方法或者使用洗涤的方法处理。 染色方法 推荐的染色方法有 Papanicolaou染色法 Shorr染色法 Diff-Quik染色法。 用上述三种染色方法，在光学显微镜亮视野下观察，精子头部的顶体区染成淡蓝色pale blue，顶体后区染成深蓝色dark blue，中段可能染成红色，尾部染成蓝色或淡红色reddish。通常位于头部背后或中段周围的胞浆小滴染成粉红色、红色（巴氏染色）或者橘红色（Shorr染色）。 改良巴氏染色步骤 1、80%乙醇 30秒 2、50%乙醇 30秒 3、纯水 30秒 4、Harris苏木精 4分钟 5、纯水 30