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人突变CD59的表达纯化及抗原性鉴定医学（行业资料） 文档信息 主题： 关于“行业资料”中“医学资料”的参考范文。 属性： F-01L80P，doc格式，正文33374字。质优实惠，欢迎下载！ 适用： 作为医学资料、医学资料写作的参考文献，解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容摘取等相关工作。 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：人突变CD59的表达纯化及抗原性鉴定医学 1 1 材料和方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：人突变CD59基因在卵巢癌细胞表达及其生物活性检测 6 1 材料和方法 8 2 结果 10 3 讨论 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 人突变CD59的表达纯化及抗原性鉴定医学（行业资料） 文1：人突变CD59的表达纯化及抗原性鉴定医学 ［ABSTRACT］ObjectiveTo obtain purified human mutant CD59 (hmCD59) protein and to identify the purified product with specific antiserum agait hmCD59 recombinant pALTER plasmid containing hmCD59 cDNA was trafected into CHO cells with pcDNA3 by lipofectamine. Expression of hmCD59 on CHO cells was detected by SDSPAGE. The recombinant protein was purified by ANTIFLAG M2 Affinity Gel. The antiserum was prepared with the purified hmCD59 and used to identify the purified protein was purified by ANTIFLAG M2 Affinity Gel. Furthermore, hmCD59 had specific reactivity with mouse antihmCD59 purified hmCD59 protein has been obtained successfully, which lays the foundation for preparing antibody, further functional study and clinical application of hmCD59. ［KEY WORDS］human mutant CD59; eukaryotic cells expression; purification； antigenicity CD59是一种广泛分布于组织细胞表面的糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚固膜蛋白,相对分子质量较小,只有 20 000左右,在补体活化通路的不同阶段限制补体活化，成为攻膜复合体（MAC）形成的关键抑制物,从而保护自身正常的组织细胞免受补体损伤［1］。国内外研究显示，人CD59糖化后失去抑制MAC的功能［2］，突变人CD59(hmCD59)在高糖环境下更加易于糖化失活，抗补体活性更快降低［3］ ，MAC沉积增加，内皮释放生长因子，引发糖尿病病人血管增殖［4］。人类糖尿病血管并发症发生的潜在机制仍然不十分清楚，尤其是hmCD59与糖尿病并发症的相关性鲜有报道。本研究报道hmCD59蛋白的表达、提取、纯化及抗原性鉴定，为下一步制备抗hmCD59单克隆抗体并对其进行临床应用研究奠定基础。 1 材料和方法 材料 质粒、菌株与细胞株 质粒hmCD59PALTER由本室构建保存。pcDNA3由美国哈佛大学提供。CHO细胞株由本室保存。 主要试剂 EcoRⅠ购自宝生物大连有限公司。RPMI 1640培养基购自HyClone公司。小牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品。G418选择性抗生素购自于Amresco公司。LipofectamineTM2000为Invitrogen公司产品。ANTIFLAG M2 Affinity Gel FreezerSafe为SigmaAldrich公司产品。Vivaspin 2超滤浓缩离心管为Sartorius公司产品。弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂均为Sigma公司产品。HRP标记的羊抗小鼠IgG为北京中山生物技术有限公司产品。其他试剂均为国产或进口分析纯。 实验方法 质粒hmCD59PALTER的鉴定 将hmCD59PA