基因工程基础知识梳理一.docx

第 PAGE 页 基因工程根底学问梳理〔一〕 一, DNA重组技术的根本工具 基因工程又叫＿＿＿＿＿＿＿，指根据人们的愿望，进展严格的设计，通过体外DNA重组与＿＿＿＿＿＿＿等技术，给予生物以新的遗传特性，从而创建出更符合人们须要的新的生物类型与生物产品。其操作水平是在＿＿＿＿＿＿＿上进展设计与施工，操作环境是在生物体外。 1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀〞 〔1〕主要来源：＿＿＿＿＿生物。 〔2〕特点：能够识别DNA特定的＿＿＿＿＿＿＿，切开两个核苷酸之间的＿＿＿＿＿。 〔3〕DNA末端：限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式： ＿＿＿＿＿与 ＿＿＿＿＿。 2．DNA连接酶——“分子缝合针〞 〔1〕作用：将双链＿＿＿“缝合〞起来，复原被限制酶切开的两个核苷酸之间的＿＿＿＿＿。 〔2〕种类 ①E·coli DNA连接酶：只能缝合DNA的＿＿＿＿＿＿。 ②T4DNA连接酶：即可缝合DNA的黏性末端，又可缝合双链DNA的＿＿＿＿＿。 3．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车〞 〔1〕载体的种类 ①质粒：是一种袒露, 构造简洁, 独立于细菌拟核DNA之外，并具有＿＿＿＿＿实力的＿＿＿＿＿。 ②＿＿＿＿＿的衍生物。 ③动植物病毒。 〔2〕质粒载体的特点 ①能够在细胞内＿＿＿＿＿＿＿。 ②具有一个或多个＿＿＿＿＿＿＿，便于供外源DNA片段插入其中。 ③具有特别的＿＿＿＿＿＿＿，供重组DNA的鉴定与选择。 〔3〕质粒载体的处理：真正被用作载体的质粒，都必需在自然质粒的根底上进展＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 二, 基因工程的根本操作程序 1．目的基因的获得 〔1〕目的基因：指编码蛋白质的＿＿＿＿＿。 〔2〕获得目的基因的方法 ①从基因文库中获得目的基因 a．基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的很多＿＿＿＿＿，导入＿＿＿＿＿的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 b．基因文库与种类 〔ⅰ〕基因组文库：含有一种生物的＿＿＿＿＿基因 〔ⅱ〕局部基因文库：含有一种生物的＿＿＿＿＿基因 c．目的基因的获得依据： 〔ⅰ〕基因的＿＿＿＿＿序列； 〔ⅱ〕基因的功能； 〔ⅲ〕基因在染色体上的位置； 〔ⅳ〕基因的＿＿＿＿＿产物mRNA； 〔ⅴ〕基因的翻译产物蛋白质。 ②利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR的含义：是一项在生物体外＿＿＿＿＿特定DNA片段的核酸合成技术。 b．条件：基因的＿＿＿＿＿。 c．过程：目的基因受热形成＿＿＿＿＿，与引物结合，在＿＿＿＿＿的作用下延长形成DNA。 d．方式：指数扩增＝2n〔n为扩增循环的次数〕 ③人工合成法：假设基因较小, ＿＿＿＿＿序列，可以人工合成。 2．基因表达载体的构建 〔1〕表达载体的组成：目的基因＋＿＿＿＿＿＋终止子＋标记基因。 〔2〕表达载体的功能 ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且＿＿＿＿＿给下一代。 ②使目的基因＿＿＿＿＿与发挥作用。 〔3〕启动子：位于基因的＿＿＿＿＿，它是＿＿＿＿＿识别与结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 〔4〕终止子：位于基因的尾端，终止＿＿＿＿＿。 〔5〕标记基因：＿＿＿＿＿是否含有目的基因。 3．将目的基因导入受体细胞 转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持＿＿＿＿＿的过程。 〔1〕将目的基因导入植物细胞方法： ①农杆菌转化法 a．农杆菌特点：易感染＿＿＿＿＿植物与裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染实力；Ti质粒的＿＿＿＿＿可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上。 b．转化过程：目的基因插入＿＿＿＿＿→农杆菌→导入植物细胞→稳定维持与表达 ②基因枪法。 ③花粉管通道法。 〔2〕将目的基因导入动物细胞 ①方法：＿＿＿＿＿注射技术。 ②操作程序：目的基因表达载体提纯→取卵〔受精卵〕→显微注射→＿＿＿＿＿→新性状的动物。 〔3〕将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快, 多为＿＿＿＿＿, 遗传物质少。 ②转化：＿＿＿＿＿处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→＿＿＿＿＿ 细胞汲取DNA分子。 4．目的基因的检测与鉴定 〔1〕检测 ①方法：采纳＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技术，抗原－抗体杂交技术。 ②内容： a．检测转基因生物的＿＿＿＿＿上的目的基因。 b．检测目的基因是否转录出了mRNA。 c．检测目的基因是否翻译成蛋白质。 〔2〕鉴定：＿＿＿＿＿鉴定, 抗病鉴定等。 【答案】 一, 基因重组技术　　转基因　　DNA分子水平 1．原核　　核苷酸序列　　磷酸二酯键　　黏性末端　　平末端 2．DNA片段　　磷酸二酯键　　黏性末端　　平末端 3．自我复制　　双链环状DNA分子　　λ噬菌体　　自我复制　　限制酶切割位点　　遗传标记基因　　人工改造　　 二, 1