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莽草酸脱氢酶 ( )活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
SD
货号: UPLC-MS-4468
规格: 50T/48S
产品组成 :使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致 ,有疑问请及时联系工作人员 。
试剂名称 规格 保存条件
提取液 液体 60mL×1瓶 4℃保存
试剂一 液体 20mL×1瓶 4℃保存
试剂二 粉剂×1瓶 4℃保存
试剂三 粉剂×2 瓶 -20℃保存
溶液的配制:
1、 提取液:内含不溶物,用前摇匀。
2、 试剂二:临用前加入 10mL 蒸馏水溶解。
3、 试剂三:临用前每瓶加入 11mL 蒸馏水溶解。
4、工作液的配制:根据用量按照试剂一:试剂二:试剂三为7:4:8 的体积比例充分混匀,现用现配,用前 25℃
预热 15min。
产品说明 :
莽草酸途径是存在于植物和微生物中的一条重要的代谢途径,莽草酸脱氢酶(EC 5) 是莽草酸合成代谢
途径中催化第四步反应的关键酶。
莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH,检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。
注意 :实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验 。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测 。
需自备的仪器和用品 :
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤 :
一 、样本处理 (可适当调整待测样本量 ,具体比例可以参考文献 )
1、组织:按照组织质量 (g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例 (建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取
液 (加入前摇匀))进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
4
2、细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量 (10 个):提取液体积 (mL)为500~1000:
1 的比例 (建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞 (功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);
然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3、液体:直接检测。
二 、测定步骤
1、 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、 操作表:在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂:
电话:400-998-2324 邮箱:service_uplc_ms@163.com 网址:
本产品仅供科学研究使用!请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途!-上海液质检测技术有限公司
第 1 页 共 2 页
试剂名称 空白管 测定管
工作液 (µL) 950 950
样本 (µL) 50
蒸馏水 (µL) 50
加入样本即开始计时,充分混匀后于 340nm 处测定 20s 时的吸光值 A1和5min20s 时的吸光值 A2,
计算 ΔA 测定管 A2 测定-A1测定,ΔA 空白管 A2 空白-A1空白,ΔA ΔA 测定管-ΔA 空白管 (空白管
只需做 1-2 次)。
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