糜蛋白酶活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4485.pdf

微量法 糜蛋白酶活性检测试剂盒说明书 货 号 ：UPLC-MS-4485 规 格 ：100T/96S 产品组成 ：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致 ，有疑问请及时联系工作人员 。 试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体 100mL×1瓶 4℃保存 试剂一 液体 10mL×1瓶 4℃保存 试剂二 粉剂×1瓶 -20℃保存 试剂三 液体 5mL×1瓶 4℃保存 溶液的配制： 1、 试剂二：临用前溶于 1.6mL 甲醇中，再用水定容至 10mL。可分装后-20℃保存，避免反复冻融。 产品说明 ： 糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与 胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非 脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。 糜蛋白酶催化 BTEE 水解，产物在 256nm 有特征光吸收；通过测定 256nm 光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶 活性。 注意 ：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验 。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测 。 需自备的仪器和用品 ： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸 馏水。 操作步骤 ： 一 、样本处理 （可适当调整待测样本量 ，具体比例可以参考文献 ） 1. 组织：按照组织质量 （g）：提取液体积 （mL）1：5-10 的比例 （建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进 行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清即粗酶液。 2. 血清 （浆）：直接检测。 二 、测定步骤 1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至256nm，蒸馏水调零。 2、 试剂一置于25℃水浴中保温30min。 3、 样本测定： 电话：400-998-2324 邮箱：service_uplc_ms@163.com 网址： 本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司 第 1 页 共 2 页 试剂名称 （μL） 测定管 试剂一 90 试剂二 90 试剂三 20 样本 20 将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96孔UV 板后充分混匀，于 256nm 处测定初始吸光值 A1和3min 时的 吸光值 A2，计算 ΔA A2-A1。 三 、糜蛋白酶活性计算公式 A 、按微量石英比色皿计算 ： 1、按样本蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟水解 1μmolBTEE 为一个酶活单位。 糜蛋白酶活(U/mgprot) (ΔA×V 反总÷ε÷d)÷(Cpr×V 样)÷T 3.8×ΔA÷Cpr 2、 按样本质量计算 活性单位定义：25℃每克样本每分钟水解 1μmolBTEE 为一个酶活单位。糜 蛋白酶活(U/g 质量) (ΔA×V 反总÷ε÷d)÷(W×V 样÷V 提取)÷T 3.8×ΔA÷W 3、 按血清 （浆）体积计算 活性单位定义：25℃每毫升血清 （浆）每分钟水解