硫氧还蛋白还原酶（TrxR）活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4355.pdf

硫氧还蛋白还原酶 （ ）活性检测试剂盒说明书 TrxR 微量法 注意 ：本产品试剂有所变动 ，请注意并严格按照该说明书操作 。 货号 ：UPLC-MS-4355 规格 ：100T/96S 产品组成 ：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致 ，有疑问请及时联系工作人员 。 试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体 120mL×1瓶 4℃保存 试剂二 液体 3mL×1瓶 4℃保存 试剂三 粉剂×2 支 -20℃保存 试剂四 液体 30μL×1支 -20℃保存 溶液的配制： 1、 试剂三：临用前取 1支加入 1.667mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃保存 1周。 2、 试剂四：临用前根据样本数量将试剂四用无水乙醇稀释 10倍后使用。 产品说明 ： TrxR 是一种 NADPH 依赖的包含 FAD 结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成 员，与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与GR 活性类似，催化 GSSG还原生成 GSH， 是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。 + TrxR 催化NADPH 还原DTNB 生成TNB 和NADP ，TNB 在412nm 有特征吸收峰，但还原型谷胱甘肽与 DTNB 同样能反应生成 TNB，因此本试剂盒利用 2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷胱甘肽，通过测定 412nm 波长处 TNB 的增加速率，即可计算 TrxR 活性。 注意 ：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验 。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测 。 需自备的仪器和用品 ： 低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水、无 水乙醇。 操作步骤 ： 一 、样本处理 （可适当调整待测样本量 ，具体比例可以参考文献 ） 1、组织：按照组织质量 （g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例 （建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一） 进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待检测。 4 2、细菌、细胞：按照细胞数量 （10 个）：试剂一体积 （mL）为500~1000：1的比例 （建议500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞 （功率 300w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后 10000rpm，4℃，离心 10min， 取上清置于冰上待测。 测定前将上清液与试剂四以50：1的体积比混匀 （即取100μL上清液加入2μL试剂四混合）37℃水浴30min 注 ： 后至冰上。 电话：400-998-2324 邮箱：service_uplc_ms@163.com 网址： 本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司 第1页共3 页 二 、测定步骤 1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 后，调节波长到 412nm，用蒸馏水调零。 2. 试剂一在 25℃ （一般物种）或者37℃ （哺乳动物）预热30min。 3. 空白管 ：取微量玻璃比色皿或 96孔板，加入 20μL 试剂二，20μL 试剂三，160μL 试剂一，迅速混匀后于 412nm 测定 10s 时的吸光度，37℃水浴 5min 迅速拿出测量 412nm 下的吸光度记为 A1和A2。计算 ΔA 空白管 A2-A1。 4. 取微量玻璃比色皿或 96孔板，加入 20μ