免疫测定方法学和临床应用演示文稿.pptVIP

第三代抗-HCV检测系统 核心区抗原比例相对下降,而相应也增加了NS3区C33C的比例,优化了试剂盒的组装工艺； 利用现代基因重组技术,对一些重要抗原采用更好的表达、纯化系统,利用先进的生产工艺、使包被抗原的活性更强,增加了检测的灵敏度,减少了非特异性反应； 加入了NS5区抗原。 丙肝病毒抗体 现在是30页\一共有47页\编辑于星期三 目前我国多采用第三代抗-HCV ELISA试剂,其敏感性超过99%,虽然目前缺乏判断其敏感性的金标准,但对于免疫功能正常的HCV RNA阳性感染者,抗-HCV检出率也高于99%。 丙肝病毒抗体 现在是31页\一共有47页\编辑于星期三 补充/确认实验:重组免疫印迹 (RIBA) 检测原理：以待测血清中的HCV抗体和分别固定在硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、尼龙膜等载体上的不同HCV抗原之间的特异性结合反应为基础,测定待测样品中抗-HCV的存在和有无。 丙肝病毒抗体 现在是32页\一共有47页\编辑于星期三 因为HCV的各种抗原分别被单独固化在载体的不同位置上,因此,该项检测可以区分待测样品对HCV不同抗原的不同反应。 目前RIBA HCV已经得到FDA的认可,成为抗-HCV确认的标准。 临床意义：RIBA阳性的患者中75-80%为病毒血症(HCV RNA);RIBA阳性而血清中没有HCV RNA时提示可能为既往感染。 丙肝病毒抗体 现在是33页\一共有47页\编辑于星期三 实时荧光监测PCR 检测原理：在PCR扩增反应管内加入了标记有两种染料的针对靶序列的探针,每当一次扩增反应中一条探针与靶序列退火结合后,整个反应体系就会增加一个单位的荧光.从而得出每一次扩增循环结束后产物的量. 丙肝病毒抗体 现在是34页\一共有47页\编辑于星期三 临床意义： 特异性强：抗-HCV阳性并不能代表现症感染,丙型肝炎的诊断标准是HCV-RNA. 敏感性高：可发现抗-HCV阴性者HCV感染. 阳性出现早：在“窗口期”没有抗-HCV产生,但可检测出RNA. 可指导用药：为疗效观察及预后判断提供指标. 丙肝病毒抗体 现在是35页\一共有47页\编辑于星期三 与HBV DNA相比，HCV RNA检测更为复杂和困难,检出率低: 血清中病毒含量低,且有一定波动,呈间歇阳性; 易被RNA酶降解; HCV RNA受进食的影响,HCV易与血中脂质及脂蛋白结合,致使其检出率降低; 二次PCR,其中任何步骤的问题均易影响其检出。 丙肝病毒抗体 现在是36页\一共有47页\编辑于星期三 免疫测定方法学和临床应用演示文稿 * 现在是1页\一共有47页\编辑于星期三 * （优选）免疫测定方法学和临床应用 现在是2页\一共有47页\编辑于星期三 免疫分析技术 早期的免疫分析技术: 免疫扩散、免疫电泳、直接及间接血凝、被动血凝、补体结合实验 特点:这些检测方法成本低、结果易于判断、技术上便于掌握,但不便于免疫检测自动化 后来的免疫分析技术: 放射性核素标记、荧光免疫标记、酶免疫标记、稀土元素标记及化学发光分子标记 特点:快速、灵敏、特异、易于测定等实验室的免疫检测自动化奠定了基础 现在是3页\一共有47页\编辑于星期三 待测物质浓度与检测手段 临床化学分析 10 -12 10 -9 10 -6 10 -3 10 -0 pg/mL ng/mL mg/mL mg/mL g/L 免疫分析 Therapeutic Drugs Thyroid Hormone Fertility Hormone Allergy Cancer Markers Infectious Disease Vitamins Serum Proteins 免疫分析技术 现在是4页\一共有47页\编辑于星期三 放射免疫的创立 1959 美国Yalow & Berson 1960 英国 Ekim’s 1977 获诺贝尔医学生物学奖 医学生物学超微量分析的里程碑 免疫分析技术 现在是5页\一共有47页\编辑于星期三 放射免疫的精髓 R：放射性核素示踪 高灵敏 不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号 (标记物的放大效应) RIA I：免疫学反应 高特异 废除以往沿用的无机或有机试剂，代之以抗体为结合剂 免疫分析技术 现在是6页\一共有47页\编辑于星期三 放射免疫面临的挑战 半衰期短，限制了药盒使用寿命 由于标记物的不断变化，带来药盒批间、批内较大的差异，标准曲线无法保存备用 反应时间过长(数小时至过夜) 结果测量依靠时间累计，至少每一样品一分钟 其主要的缺陷是： 理论和实践证明其分析的限度是10-7分子/mL或10-12 g/mL，要再提高有困难 以上原因都造成放射免疫无