《生化工程实验》教学大纲.docx

生化工程实验

课程编号：14120207005

适用专业：生物技术

学时数：48

学分数：1.5

一、实验目的与要求：

《生化工程实验》是生物技术专业必修课。本课程主要阐述如何从生物材料（动物、植物、微生物等）获取纯净、完整而有活力的生物大分子，以供对其结构与功能进行深入研究，从而揭示各种生命现象的本质。通过本课程的学习，使学生掌握如何从生物细胞分离纯化得到相关的生物大分子。不仅要使学生掌握一系列分离纯化技术而且要掌握纯度鉴定技术。主要介绍各专项技术的原理，同时也介绍操作要点及技巧，为学生从事分子水平的生物产品纯化研究奠定良好基础。

本课程设计思路是以蚯蚓为材料，提取、纯化纤溶酶，最终得到电泳纯级的纯品，并对其纯度、性质进行鉴定，展开各项实验，将各个实验组织为一个完整的技术体系；使同学们都感到他们正在进行一项科研课题，更能激发同学们的学习兴趣，使学生在掌握操作技能的同时，更培养他们的科研思路和创新意识。

二、实验项目与提要：

序号

实验项目

必做

选做

时数

内容提要

实验

类型

每套仪

器人数

1

生物大分子的抽提与沉淀技术

必做

3

1．采用机械法将蚯蚓进行破碎。

2．选择适宜的缓冲液提取粗酶液

3．盐的选择

4．盐浓度的确定

5．盐析

6．沉淀蛋白的收集

综合性

2

2

脱盐

必做

3

1．透析法

（1）对透析袋进行选择和处理。

（2）将蛋白质沉淀装入透析袋中。

（3）在水或缓冲液中进行透析。注意更换外液

2．凝胶层析法

（1）选择并处理凝胶。

（2）装住

（3）点样

（4）层析

（5）收集样品、处理样品

综合性

2

3

离子交换层析

必做

6

1、离子交换剂选择和处理

2、装柱与平衡

3、样品的处理与上样

4、洗脱

5、样品的收集和处理

综合性

2

4

凝胶层析

必做

6

1、选择并处理凝胶。

2、装住

3、点样

4、洗脱

5、收集样品、处理样品

综合性

2

5

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)

必做

6

1、配制连续或不连续凝胶管或凝胶板

2、点样

3、电泳

4、染色及测活

5、鉴定和制备

综合性

4

6

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（测定纤溶酶的分子量）

必做

6

1、配制连续或不连续凝胶管或凝胶板

2、点样

3、电泳

4、染色

5、鉴定

综合性

4

7

等电聚焦(IEF)

必做

6

1、制备PH梯度凝胶（PH=3—7）

2、准备电极缓冲液

3、加样

4、聚焦

5、样品组分的检测

综合性

4

8

WesternBlotting

必做

12

1.?配制不连续凝胶

2.?电泳

3.?转膜

4.?一抗孵育

5.?二抗孵育

6.?显影

综合性

4

三、成绩考核方法

1.平时成绩：占总学分10%（包括出勤、课堂提问、讨论情况等）。

2.实验成绩：占总学分60%（包括出勤、实验报告等）。

3.考试成绩：占总学分30%

4.综合考核成绩：100%

四、教材及主要参考书：

教材：

《现代生物技术概论》，何忠效等，北京师范大学出版社，北京，1999。

主要参考书：

[1]《酶学研究技术》，张树政等，科学出版社，北京，1987。

[2]《色谱法》，林卓坤，科学出版社，北京，1984。

[3]?《电泳》（第二版），何忠效，张树政，科学出版社，北京，1999。

[4]《现代生化技术》，郭永，华南理工大学出版社，广州，1996。

[5]《生化实验方法和技术》，张龙翔等，科学教育出版社，北京，1997

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