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艾滋病检测原理和技术规范ppt课件
艾滋病检测原理和技术规范;一、艾滋病与艾滋病病毒;(有A~E多个亚型)
与一种感染灰身白脸猴的猴免疫缺陷病毒(SIV)相似。; 艾滋病病毒感染后,可严重破坏人体的免疫系统,使人体丧失抵御各种疾病的能力,有利于各种病原体的侵入,从而导致各种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤,最终导致死亡,病死率可达100%。;HIV-1 M组;;感染分期;二、艾滋病检测的原理及方法;临床诊断;检验标志物;诊断试剂;硒标法;;PA的操作和结果判断;5 450/630nm下测定OD值;快速法可否单独使用?;■ 针对各种病毒蛋白的特异抗体
■ 区分ELISA真阳性与假阳性
■ 检测HIV-1和HIV-2;;;全自动免疫印迹仪;;筛查试验:诊断出阴性样本,
并为阳性/可疑样本排除非特异条带。
复检1(试剂A):对阳性/可疑样本排除操作误差。
复检2(试剂B):对阳性/可疑样本排除试剂误差。
确证试验:诊断出阳性样本。;临床分期;AIDS 指征性疾病 (美国CDC,1993, 抗-HIV阳性及其中一种疾病即可诊断);HIV !;三、艾滋病检测技术规范;主要内容:
样品采集和处理
检测方法
(HIV抗体、病毒核酸、
病毒载量、CD4、HIV抗原检测)
安全防护、职业暴露
质量管理
(质量保证、质量控制、质量评价)
实验室质量考评
HIV诊断试剂质量评估;筛查试验
(试剂A);检测方法;HIV待确证样品;认真填写各类表格(最好能打印),及时上报。;各筛查实验室每月5日前上报上月检测数据:;四、艾滋病检测的质量控制; 行政支持 重视、投入、理解
实验室规范化建设 规范、制度、程序
人员要求 资质条件、培训和轮训;■ 建立各项规章制度和操作程序,定期检查;
■ 人员定期接受培训和复训,培养良好的业务素质;;■ 仪器设备运作正常,定期检定和校准,妥善维护;
■ 样品流转有序,记录详细,保存规范;
■ 采用合格试剂,经常核查试剂质量,正确保存和使用;
■ 环境条件符合要求,有监控有记录;
■ 严格按照规范和试剂说明书操作;
■ 建立各类质量记录表格,资料保存完整,溯源性强;
■ 坚持开展室内质控,参加室间比对和能力验证;
■ 安全防护、废物处理措施落实,建立人员健康监护档案。;■ 每个实验室必须配备至少2种不同原理/不同厂家的试剂,其中一种必须是ELISA(第三代、双抗原夹心、两步法)。
■ 第一次筛查试验推荐使用高敏感性的ELISA法,快速法可用于应急试验或复核试验。
■ 按政府招标目录采购,保存供应商的资质证明文件,试剂批批检报告。
■ 登记试剂采购和使用情况,注意保存条件并实行监控。
■ 试剂和样品应分开存放,过期试剂必须及时处理。
■ 不同品牌、不同批号的试剂不能混用(包括阳性对照)。;■ 严格按照说明书操作和判断。
■ 实验室环境条件(温度、湿度)的控制。
■ 试剂使用前室温平衡的重要性。
■ 正确使用恒温设备(校准温度、放置方式、放置位置)。
■ 固定样品排列方式,固定对照品位置。
■ 统一加样的方式方法(加样器使用习惯、样品加样顺序)。
■ 加样过程避免污染(气溶胶、加样器移动路线)。
■ 按加样顺序加入各种试剂,加入质控对照前必须摇匀。
■ 严格控制反应温度和时间。;■ 每次实验必须设立内部质控对照和外部质控对照。
■ 内部对照质控血清必须使用同批号试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清,其数量和结果控制范围,按该试剂盒说明书的要求设立和判定。
■ 设立内部质控对照可以有效监控该试剂盒的检测能力和操作过程的正确性。
■ 外部对照质控血清包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清(由权威检验质控机构供应的定值产品),但通常可以只设一个弱阳性对照。
■ 使用外部质控对照制作质控图,可有效监控检测的重复性和稳定性、以及试剂盒的批间或孔间差异。
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