畜禽繁殖与改良人工授精.ppt

三、稀释液配制的注意事项 1.消毒：配制好的稀释液，瓶口用硫酸纸包好，外用布盖上，扎紧，置高压锅中，0.8kg、105℃的压力维持30min；糖类稀释液只能用0.5kg的压力，或用水煮沸30min即可。 2.用于配制稀释液以及封装保存精液的一切用品，都必须消毒，使用前再用稀释液冲洗2～3次。 3.稀释液应新鲜、无菌，现用现配。 4.在稀释液中加入卵黄、奶类及抗菌素等药物应在稀释液降温到35℃以下时再加入。 5.稀释液加入卵黄和抗菌素前应过滤。0.02～0.2 μm滤膜。 6.成本低，配制方便，精子存活率高，受胎率高。 四、精液的稀释 （一）稀释液的种类 根据性质和用途可分为4类。 1.现用稀释液：适用于采精后立即授精，以单纯扩大精液容量，增加输精母畜头数为目的。此类型稀释液以简单的等渗的糖类和奶类为主体。 2.常温保存稀释液：适用于精液在常温下作短期保存，具有以糖类和弱酸盐为主体的pH偏低的特点。 3.低温保存稀释液：适用于精液低温保存，具有含卵黄或奶液为主体的抗冷休克特点。 4.冷冻保存稀释液：适用于精液超低温冷冻保存，具有甘油、二甲亚砜等抗冻物质为主体特点，此类稀释液比较复杂，有仅一种稀释液组成，也有由多种稀释液组成。 （二）精液稀释的方法 1.先将稀释精液所用的器具加温到30～35℃，并用等温稀释液冲洗2～3次（防止温度和渗透压的损害）。 2.新采集的精液及时稀释，室温低于20℃时，要用精液无菌保温箱。精液放置时间过长则会降低精子活率，一般在0.5h内进行稀释。 3.稀释液与精液的温度必须一致，可用消毒温度计测量。采精时集精杯加保温措施，稀释液预先加温到30℃左右，置于精液保温箱中。 4.在稀释精液时，将稀释液沿杯壁缓缓加入精液中，一般将稀释液与精液置于预定温度的保温瓶中作等倍稀释处理。然后轻轻转动精液瓶或用灭菌棒搅动，使之混匀。 5.如果进行低倍稀释（3～5倍）可一次完成，若高倍稀释时则须分两步进行，即先低倍稀释，防止精子所处的环境突然改变，对精子造成打击。间隔1.5～2h后，精液降至保存（平衡）温度时，进行二次稀释。 6.精液稀释后，先静置片刻，再做活率检查，如果活率没有变化，则分装保存。如果活率下降，则说明稀释或操作不当，不宜使用，并检查原因。 （二）稀释倍数 精液的稀释应保证每输精剂量所含直线前进运动的精子数不低于输精标准要求。精液稀释倍数应根据以下依据决定： 1.稀释液种类：糖类稀释液→低倍稀释，奶类稀释液→高倍稀释。 2.保存时间：时间长→高倍稀释，时间短→低倍稀释。 3.精液保存方法：冷冻保存稀释倍数应低一些，而液态保存稀释倍数可高些。 4.畜种：羊、牛、鹿精子密度大，稀释的倍数应大一点，而猪、马密度小，则不宜作高倍稀释。 （三）每次输精保持受精力所需的最低有效精子数 畜 种 牛 山羊 猪 马 稀释倍数 10～40 2～4 2～4 2～3 输精量（mL） 0.2～1 0.5～1 30～40 15～30 有效精子数 2000～5000万 5000万 2亿 2.5～5亿 牛：射精量8ml，活率0.7，密度12亿个/ml，每毫升精液中有效精子数12×0.7=8.4亿个，若每毫升稀释后的精液中含有3000万个有效精子，则每毫升可稀释倍数8.4亿÷0.3亿=28倍。可稀释：8ml×28=224ml，可供224头母牛输精。 一、保存目的 1.延长精子存活时间，保持其受精能力；2.扩大种公畜（优良）精液利用率；3.方便运输，扩大精液的利用范围。 二、保存方法 （一）常温保存法 常温保存是指在15～25℃之间的温度范围内保存精液的方法。 1.原理：利用稀释液的弱酸性（pH 6.2～6.4）环境抑制精子活动，以减少其能量消耗，使精子保持在可逆性的静止状态而不失去受精能力。即当精液pH值降低到一定的酸度时，精子运动及代谢受到可逆性抑制，但当pH值恢复到精液正常的pH值时，精子可以复苏，从而对精液进行保存的方法。 第五节 精液的保存 2.调整pH的方法：为了使稀释液的pH达到所需范围，可以选用下面三种方法中的一种： （1）向稀释液中输入CO2，如伊里尼变温稀释液(IVT)。 （2）利用精子在保存过程中自己产生的CO2，自行调节pH，如康奈尔大学稀释液(CUE)。 （3）在稀释液中配有酸类物质和充以氮气，如已酸稀释液及一些植物汁液（椰汁稀释液，CME）。 牛冷冻精液稀释液配方 ●海带多糖0.025 ～ 0.2％、葡萄糖 2 ～ 2.5％、柠檬酸钠0.9 ～ 1.5％、蒸馏水65 ～ 75％、白蛋白17 ～ 18％、甘油7 ～ 10％、青霉素8.5 ～ 10万IU ●