（山西专用）高三生物一轮复习第37讲DNA和蛋白质技术课件新人教版选修1.ppt

用NaCl溶液 ①加2 mol/L NaCl溶液，溶解提取的细胞核物质 ②(加蒸馏水)0.14 mol/L NaCl溶液使DNA析出 ③加2 mol/L NaCl溶液，溶解滤取的DNA黏稠物 ④用2 mol/L NaCl溶液，溶解丝状物用于鉴定DNA 　　4.什么是3′端和5′端？DNA复制为什么需要引物？ 　　为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端，而含磷酸基团的末端称为5′端；一个双链DNA分子中含2个3′端和2个5′端，如果一条链的方向是3′→5′，则另一条链的方向就是5′→3′，这就是反向平行的含意。 　　DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。PCR实验中，引物长度通常为20～30个核苷酸。 　　5.PCR实验中应注意哪些问题？如何进行PCR结果的分析与评价？ 　　 (1)PCR实验中的注意事项： 　　①避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前进行高压灭菌。 　　②缓冲液和酶分装成小份，-20 ℃低温保存。 　　③每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。 　　④混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。 　　(2)PCR结果的分析与评价： 　　①对于教材中的方法，可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果。 原理：DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关。 过程：稀释→对照调零→测定→计算。 　　②对于电泳检测的方法，可以通过在紫外线下直接观察DNA带的分布及粗细程度来评价扩增的效果。 　　③扩增不成功的可能原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。 　　6.分离血红蛋白的样品处理中，红细胞洗涤时为什么要低速短时间离心，并且要洗涤三次？ 　　红细胞洗涤时，洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一起沉淀，达不到分离的效果。洗涤三次后，若上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白。 　　7.凝胶色谱柱的装填有什么要求？如何进行样品的加入和洗脱？ 　　在色谱柱中填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。一是在装填凝胶柱时，不能有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。二是在凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。一旦发生上述两种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。 生物技术实践 第 37 讲 DNA和蛋白质技术 选修1 1．进行DNA的粗提取与鉴定。 2．尝试PCR技术的基本操作和应用。 3．尝试蛋白质的提取和分离。 1．(2010·江苏)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下： 材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10 g。剪碎后分成两组，一组置于20 ℃、另一组置于－20 ℃条件下保存24 h。 DNA粗提取： 第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。 第二步：先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液，再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。 第三步：取6支试管，分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表。 (注：“＋”越多表示蓝色越深) 分析上述实验过程，回答下列问题： (1)该探究性实验课题名称是 。 (2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少 。 探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响 DNA断裂 (3)根据实验结果，得出结论并分析。 ①结论1：与20 ℃相比，相同实验材料在－20 ℃条件下保存，DNA的提取量较多。 结论2： 。 ②针对结论1，请提出合理的解释： 。 (4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是： ，然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。 等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提