基于NRF2和PGC-1α信号通路的安五脂素抗小鼠疲劳作用研究.pdf

摘 要 目的：明确安五脂素对运动性疲劳小鼠的抗疲劳作用并探讨该作用与核因子E2 相关因子2 （Nuclear factor erythroid-2related factor 2,NRF2）及过氧化物酶体增 殖物激活受体-γ共激活因子-1α （Peroxisome proliferator-activated receptorγ coactivator-1α,PGC-1α）信号通路调节相关作用机制。 方法：将80 只雄性ICR 小鼠随机分为以下4 组，即空白对照组 （SED-Con 组， 0.5%羧甲基纤维素钠灌胃，静坐实验），运动性疲劳模型组（MOD-Con 组，0.5% 羧甲基纤维素钠灌胃，力竭性运动实验），安五脂素空白组 （SED-Anwu 组，安 五脂素4 mg/kg 灌胃，静坐实验）及安五脂素模型组 （MOD-Anwu 组，安五脂 素4mg/kg 灌胃，力竭性运动实验），持续给药7周，训练前一小时给药，每日 给药一次。通过负重游泳实验，疲劳转棒实验，前肢握力实验及悬尾实验观察安 五脂素对小鼠运动耐力的影响，通过化学比色法检测小鼠血清中尿素氮 （Blood ureanitrogen,BUN）、乳酸（Lactic acid,LD）、乳酸脱氢酶（Lactatedehydrogenase, LDH）、肌酸激酶 （Creatinekinase,CK）、血清磷 （Inorganicphosphate,Pi）、 肝脏及骨骼肌组织中肝糖原 （Liver glycogen,LG）、肌糖原 （Muscle glycogen, MG）；检测小鼠血清及骨骼肌中超氧化物歧化酶 （Superoxidedismutase, SOD）、 丙二醛（Melondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶 （Glutathioneperoxidase, GSH-Px）以及过氧化氢酶 （Catalase,CAT）含量；通过酶联免疫检测法 （ELISA） 检测小鼠血清及骨骼肌中硫代巴比妥酸反应物 （Thiobarbituric acid reactive substances,TBARS）、8-羟基脱氧鸟苷 （8-hydroxy-2deoxyguanosine, 8-OHdG） 和活性氧 （Reactiveoxygen species,ROS）水平的变化；HE 染色观察安五脂素对 小鼠腓肠肌组织病理学改变的影响；免疫组织化学法检测腓肠肌组织中NRF2、 B 淋巴细胞瘤-2 （B-celllymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达情况，Westernblot 法观察小 鼠骨骼肌组织中胞浆蛋白伴侣分子Keap1 （Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1）、NRF2、血红素加氧酶 1 （Heme oxygenase-1,HO-1）、还原型辅酶I （II）醌氧化还原酶 1 （NAD(P)H:quinine oxidoreductase 1, NQO1）、Bcl-2、 BCL2-AssociatedX 蛋白 （BCL2-AssociatedX,Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 I -3 （Caspase3）、单磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激酶（Adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activatedproteinkinase,AMPK）、磷酸化单磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激 酶 （Phosphorylation adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase, p-AMPK）、PGC-1α、核因子E2 相关因子1（Nuclear factor erythroid-2related factor 1,NRF1）、线粒体转录因子A （Mitochondrial transcription factorA,TFAM）蛋 白表达。 结果：与SED-Con 组相比，MOD-Con 组小鼠运动耐力显著降低 （p < 0.05或p < 0.01），BUN、LD、LDH、CK、Pi、MDA、TBARS、8-OHdG 以及ROS 水平 均显著上升 （p < 0.05或p < 0.01），LG、MG、SOD、CAT 以及GSH-Px 水平均 显著下降 （p < 0.05 或p < 0.01）；与MOD-Con 组相比，MOD-Anwu 组的运动 耐力均显著增加 （p < 0.05 或p < 0.01），BUN、