耐药结核病诊断新技术解析.ppt

耐药性结核病诊断新技术 主讲人：吴寿强 时间： 2016 年 7 月 28 日 ? 主要内容 ? 一、概述 ? 二、基因芯片技术 ? 三、熔解曲线技术 全球范围内结核病疫情严重 ? 患病率高： 新发患者 1040 万 / 年，其中有 120 万（ 11% ） HIV 患者； ? 死亡率高：每年死亡人数达 140 万 （ 13.46% ）， HIV/TB: 死亡人数 40 万 （ 33.33% ）； ? 耐药率高： 48 万新发的 MDR-TB 病例和 10 万耐利福平结核病（ RR-TB ） 病例； ? ? 接受 MDR 检测、报告和治疗的 MDR-TB 不足 1/3 ，接受治疗的 MDR-TB 治愈成功率只有 50% ? 2016 年全球结核病报告 2015 年全球估计 MDR-TB 患者数 结核病快速及时诊断是结核病防控 重要因素 灵敏准确 操作简便 检测时间短 闭管检测 检测位点全面 对新型耐药检测技术的要求 基因芯片技术 结核病耐药与基因 64-68% rps L 基因突变 70% emb B 基因突变 70% 65% 耐药 基因 93% 95% 95% rpo B 基因突变 利福平 异烟肼 50-70% kat G 基因突变 5-10% inh A 基因突变 6-13% ahp C 基因启动子区域突 变 链霉素 乙胺丁醇 多数研究报告提示：耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关 。总体上是基因一个或几个核苷酸 突变（表现增加、缺失、替代），造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列，影响药物与靶位酶结合产 生耐药 抗结核药物 检测位点 突变覆盖率 利福平 rpoB507~533 之间 (81bp) 内任意突变 95% 异烟肼 ahpC 启动子区 （ -44 ~ -30 以及 -15 ~ 3 位点） ， inh94 密码子， inhA 启动子区（ -17 ~ -8 位点）以及 katG315 密码子 70%-90% 乙胺丁醇 embB306,368,378,380,406,497 密码子突变 75%-95% 链霉素 rpsL43, rpsL88, rrs513~517, rrs905~908 位点的突变 70%-90% 氟喹诺酮 gyrA88~94 内任意突变 70%-90% 注射类二线药 rrs 基因 1401 、 1402 、 1473 、 1484 位点以及 eis 基因启动子 区 -37 、 -14 、 -13 、 -10 位点 阿米卡星 95% 卡那霉素 85% 卷曲霉素 70~80% 紫霉素 10% 基因芯片（原理） 激光共焦扫描仪 软件判读 样品制备仪 杂交仪 基因芯片方法是基于结核杆菌的利福平和异烟肼耐药 性相关的 rpoB/katG/inhA 的基因位点发生突变，通过 PCR 扩增、和固定于尼龙膜上的寡核苷酸探针进行杂交、扫描 ，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和结核 菌耐药性 。 基因芯片仪和试剂获国家 SFDA 和欧盟 CE 认证 12 基因芯片法 利福平的耐药位点 MSM 耻垢分枝杆菌 MTC 结核分枝杆菌复合群 MTR 次要分枝杆菌 MIN 胞内分枝杆菌 MAV 鸟分枝杆菌 MGA 胃分枝杆菌 MKA 堪萨斯分枝杆菌 MSC 瘰疠分枝杆菌 MUA 母牛分枝杆菌 MCH 龟分枝杆菌龟亚种 MAB 龟分枝杆菌脓肿亚种 MSZ 苏尔加分枝杆菌 MMA 海 / 溃疡分枝杆菌 MXE 蟾蜍分枝杆菌 MDI 迪氏分枝杆菌 MFO 偶发 / 猪分枝杆菌 MGI 浅黄分枝杆菌 MSI 猿猴分枝杆菌 MTE 土分枝杆菌 MPH 草分枝杆菌 CC 质控点 MNO 不产色分枝杆菌 MGO 戈登分枝杆菌 同时鉴定 MTC 与 21 种 NTM 非结核分枝杆菌 在国内 4 个省的 4 个地市级 CDC 进行了评估。 结核病和非结核的诊断 特 点 标本：菌株、涂阳痰标本 时间：约 8 小时 优点：高通量 灵敏度、特异度高 国家结核病参比实验室推荐建议