化学染色(一) 2学时.ppt

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*(二)结果观察:胞浆内出现棕黑色或深黑色颗粒为阳性反应,阳性程度标准与pox相同。(三)临床意义1、M5a:阳性2、嗜碱细胞:阳性3、吞噬细胞:阳性*(一) 原理(偶氮偶联法):氯乙酸AS-D萘酚AS-D萘酚+重氮盐(坚固蓝B)CE蓝色颗粒三、特异性酯酶染色*(二)试剂:作用液的配制:氯乙酸AS-D萘酚5mg丙酮5~8d磷酸盐缓冲液19ml固蓝B盐10mg*(三)步骤:1.新鲜涂片用10%的甲醛甲醇溶液固定30秒,水洗,晾干。2.滴加作用液37℃或室温20min,水洗,晾干。3.1%中性红复染30秒,镜检。*(四)注意事项:

1.AS-D萘酚溶液变黄或混浊即失效。2.氯乙酸AS-D萘酚溶液应避光,4℃冰箱保存。*(五)结果判断(中性分叶呈阳性为染色成功的标志)胞浆中可见细小,弥漫分布的蓝色颗粒。*CE*(六)临床意义:

粒系除早期原粒外,余阶段均为阳性,其它各系均为阴性。CE染色对粒细胞白血病有特异性的诊断价值。*四、酸性非特异性酯酶染色

(α-NAE)(一)原理:α-醋酸萘酚α-萘酚重氮盐酯酶棕黑色、灰黑色沉淀7.4~7.6(坚固盐B)*(二)试剂:1、固定液:甲醛2、作用液:α-醋酸萘酚5mg丙酮5~8d磷酸盐缓冲液10ml固蓝B盐10mg3、复染液:10g/L甲基绿水溶液*(三)步骤:1、甲醛蒸气固定、流水冲洗5分钟。2、在膜片上加作用液覆盖整个髓膜,染色30min,流水冲洗待干。NaF抑制试验:在作用液中加入1.5mg/mlNaF,同时滴加在另一张髓片上。3、10g/L的甲基绿溶液复染10min。*(四)注意事项:1、标本必须新鲜,应于取材后2天内染色。2、作用液必须新鲜配置。3、在已配好的作用液中加NaF1.5mg/ml,进行同样染色即为NaF抑制试验。*(五)结果判断:(阳性细胞胞浆呈棕色或棕黑色)染色成功指标:在部分原始单核细胞、幼稚、成熟单核细胞呈阳性;及部分粒细胞为弱阳性反应;部分成熟淋巴或个别中、晚幼红呈阳性。**(六)临床意义:1、正常分布:⑴单核系统:原单为阴性/阳性,幼稚、成熟单为强阳性,且易被NaF抑制(抑制率50%)。抑制前阳性率-抑制后阳性率氟化钠抑制率=×100%抑制前阳性率*⑵粒细胞系:各期均为阴性,有时可呈弱阳性,M3呈阳性,不被NaF抑制。⑶巨核及血小板呈阳性。⑷成熟T淋巴细胞呈阳性,B淋巴细胞及浆细胞呈阴性反应。*⑸幼红细胞为阴性,有时少数幼红细胞可呈阳性。⑹单核细胞源型组织细胞,高-雪氏细胞,

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