第九章金免疫技术.pptx

1第九章

金免疫技术

2免疫技术试剂标本AgAbAbAg

3标记免疫技术试剂标本Ag*AbAb*Ag放射性核素荧光素酶化学发光剂胶体金标记物技术放射性核素放射免疫技术荧光素荧光免疫技术酶酶免疫技术化学发光剂化学发光免疫技术胶体金金免疫技术

4金免疫测定技术金免疫组织化学染色技术金免疫技术斑点金免疫渗滤试验斑点金免疫层析试验金免疫光镜染色技术金免疫电镜染色技术

5金溶胶标记蛋白质，胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点(线)，从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。

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7制备胶体金制备免疫金建立金免疫测定技术

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胶体金的特性胶体金（金溶胶）：是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金的特性胶体性质：稳定性、对电解质的敏感性光吸收性：胶体金的光吸收峰波长随颗粒的大小而变化。呈色性：不同大小的胶体金呈现不同的颜色小颗粒--橙黄色中等颗粒—酒红色较大颗粒—深红色大颗粒—紫色

9胶体性质稳定性：稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮于液体中

10胶体金的制备化学还原法:向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子变成金原子,形成金颗粒悬液。还原材料：氯金酸（HAuCl4)还原剂：柠檬酸盐、白磷、过氧化氢、抗坏血酸。。。。最常用的制备方法：柠檬酸盐还原法通过改变柠檬酸钠的用量可制得不同大小的胶体金颗粒

111％柠檬酸三钠加入量（ml）*胶体金特性λmax呈色?162.00橙色518nm24.51.50橙红522nm411.00红色525nm71.50.70紫色535nm胶体金粒径（nm）

12制备胶体金的注意事项（1）玻璃容器必须是最好是经硅化处理的。（2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性（3）氯金酸易潮解（4）制备胶体金应用或者是高质量的去离子水。，不应使用金属药匙称量氯金酸。双蒸/三蒸馏水，绝对清洁的，，应干燥、避光保存。

13胶体金的鉴定和保存鉴定1、清亮透明2、金颗粒的大小通过观察胶体金的颜色，粗略估计金颗粒的大小；分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的粒径电镜观察保存保存于洁净的玻璃器皿中，室温或4°C，加入少许防腐剂（如0.02％NaN3）可有利于保存。

14免疫金的特性

胶体金可以和蛋白质等各种大分子物质结合，在免疫组织化学技术中，习惯上将胶体金结合蛋白质的复合物称为金探针。用于免疫测定时胶体金多与免疫活性物质（抗原或抗体）结合，这类胶体金结合物常称为免疫金复合物，或简称免疫金（immunogold）。物理吸附性：-----++++胶体金蛋白质

15免疫金的制备制备要点PH值的调整：原则上可选择待标记蛋白质等电点，也可略为偏碱蛋白质最适标记量的确定标记过程离心纯化：超速离心法免疫金最终用稀释液配成工作浓度保存：稳定剂-PEG，BSA

16待标记蛋白作系列稀释+定量胶体金+Nacl最适标记量：能保持红色不变而蛋白含量最低的一管蛋白量逐渐减低对照管

17金免疫测定技术固相载体：硝酸纤维素膜结合物：免疫金斑点金免疫渗滤试验（dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA），又称为滴金免疫测定法斑点金免疫层析试验（dotimmunogoldchromatographicassay,DICA）

18斑点金免疫渗滤试验

（dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)????????????????????????????????????????????????????????????????????操作示意图装置分解图盖微孔膜