人教版选修1酵母细胞的固定化课件20张.ppt

课题 3 酵母细胞的固定化 一、实验原理 将酶和细胞固定的方法： 包埋法 化学结合法 物理吸附法 固定对象 酶 细胞 适宜 固定方法 特点 化学结合法 物理结合法 体积小，固定一 种酶，包埋法酶 易丢失 包埋法 体积大，固定一系列酶 ，难以化学结合和吸附 一、实验原理 ? ? ? 包埋法固定化细胞 即将微生物细胞均匀地包埋在不溶于 水的多孔性载体中。 常用的载体： 明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和 聚丙烯酰胺等，本实验选用 海藻酸钠作载体 包埋酵母细 胞 海藻酸钠遇到 钙离子 会形成凝胶，从而将酵母细胞固定 在凝胶中。 二、实验材料 器材 ： 烧杯；玻璃棒；天平；滴管；容量瓶； 酒精灯； 注射器 ；三角架；石棉网 试剂： 干酵母； 无水 CaCl 2 ；海藻酸钠 ；葡萄 糖，蒸馏水 三、实验操作 ( 一 ) 制备固定化酵母细胞 酵母细胞的活化 配置物质的量浓度为 0.05mol/L 的 CaCl 2 溶液 配制海藻酸钠溶液 海藻酸钠溶液和酵母细胞混合 固定化酵母细胞 （二）用固定化酵母细胞发酵（ 课下完成 ） 1 、酵母细胞的活化 称取 1g 干酵母，放入 50ml 的小烧杯中，加 入蒸馏水 10ml 。用玻璃棒搅拌，使酵母细胞 混合均匀，成糊状，放置 1h 左右，使其活化 注意：在缺水状态下，微生物处于休眠状态。活 化就是让处于 ( ) 休眠状态 的微生物重新恢复正常的 生活状态 2 、配置物质的量浓度为 0.05mol/L 的 CaCl 2 溶液 称取无水 CaCl 2 0.83g ，放入 200ml 的烧杯 中，加入 150ml 的蒸馏水，使其充分溶解， 待用 3 、配制海藻酸钠溶液 ① 过程 称取 0.7g 海藻酸钠，放入 50ml 小烧杯中，加入 10ml 水，用酒精灯加热， 边加热边搅拌 ，将海 藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容 至 10mL ②注意事项 加热时要用 ( ) 小火 ，或者 ( ) 间断加热 ，反复几 次，直到海藻酸钠溶化为止 4 、海藻酸钠溶液和酵母细胞混合 将溶化好的海藻酸钠溶液 冷却至室温 ，加入 以活化的酵母细胞，进行充分搅拌，再转移至 注射器中 5 、固定化酵母细胞 ① 过程 以 恒定的速度缓慢 的将注射器中的溶液滴加 到配制好的 CaCl 2 溶液中，将形成的凝胶珠在 CaCl 2 溶液中浸泡 30min 左右 小组合作完成实验并思考 第一组： 0.7g 海藻酸钠 +5mL 水 （酒精灯） ? 第二组： 0.7g 海藻酸钠 +10mL 水 （酒精灯） ? 第三组： 0.7g 海藻酸钠 +15mL 水 （酒精灯） ? 第四组： 0.7g 海藻酸钠 +10mL 水 （水浴加热） ? 思考并讨论 1. 为什么用小火或间断加热海藻酸钠？ 2. 海藻酸钠浓度过高或过低会有什么现象？ 3. 为什么海藻酸钠要冷却到室温？ 4. 注射时离液面过低会出现什么现象？ 5. 你实验中遇到哪些问题？ 四、实验现象及结果分析 （ 1 ）正常为圆形凝胶珠（底部）、乳白色。如果 制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的 浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的 凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度 偏高，制作失败，需要再作尝试。 （ 2 ）中央的托尾，原因：溶液太稀（酵母细胞浓 度太低）或注射时针头离氯化钙溶液的距离太短 （ 3 ）漂浮的凝胶珠：混合不好，溶液中含有气泡。