8实验八维生素b1片含量测定的方法验证.ppt

药物分析实验 设计(shèjì)性实验 第一页，共19页。 实验(shíyàn)原理 维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride），化学名称(míngchēng)为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐 第二页，共19页。 性 质 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚(yǐ mí)中不溶 硫色素反应： 紫外吸收特性：Amax=246nm 与生物碱沉淀试剂反应 氯化物特性： 特征性鉴别(jiànbié) 含量(hánliàng)测定 氯化物检查 第三页，共19页。 原理(yuánlǐ) 特征性鉴别——硫色素反应 维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物(yàowù)分析》第六版，P258） 含量测定 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm， 第四页，共19页。 实验(shíyàn)方法 鉴别反应 取本品约5mg，加氢氧化钠试液(shì yè)2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液(shì yè)0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。 第五页，共19页。 含量测定 精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置100ml量瓶中 → 加盐酸溶液(róngyè)（9→1000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 →干燥滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中，共2份，盐酸溶液(róngyè)（9→1000）定容至刻度，摇匀 → 测 A246， 用吸光系数计算浓度。 如何计算(jì suàn)出所需要的量？ 稀释(xīshì)倍数？ 第六页，共19页。 实验内容(nèiróng)与要求 鉴别试验 吸收波长选择 精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD% 重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD% 稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD% 加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计(shèjì)加样回收率试验 含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。 如何(rúhé)引用？ 第七页，共19页。 线性关系和范围(fànwéi) 分析方法的验证(yànzhèng) 1 精密度试验(shìyàn) 2 重现性试验 3 加样回收试验 4 稳定性试验 5 第八页，共19页。 线性与范围(fànwéi) 目的 范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适用的高低限浓度(nóngdù)或量的区间 线性：测试结果与试样中被测物的浓度(nóngdù)或量直接呈正比关系的程度 要求 至少5份系列浓度(nóngdù)的对照品溶液，高、低浓度(nóngdù)之间要有明显差距，最好能有一定的比例关系。 线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r > 0.99；HPLC法，r > 0.999 列出回归方程、相关系数和线性图 第九页，共19页。 线性关系考察(kǎochá)(示例） 序号 1 2 3 4 5 浓度 （mg/ml） 0.01250 0.02500 0.03750 0.05000 0.06250 测定值 0.236 0.336 0.436 0.536 0.636 第十页，共19页。 精密度试验(shìyàn) 目的 检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度 要求 用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少(zhìshǎo)平行操作6份，浓度与信号值要在线性范围内 RSD < 2.0% ……仪器分析 第十一页，共19页。 精密度试验(shìyàn)（示例 ） 实验 序号 信号值 平均值 RSD 1 0.512 0.510 0.2% (<2.0%) 2 0.508 3 0.511 4 0.509 5 0.510 6 0.509 第十二页，共19页。 重现(zhònɡ xiàn)性试验 目的 考察样品溶液制备方法(fāngfǎ)的可靠程度 要求 同批样品按相同方法(fāngfǎ)制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内 RSD < 2.0% ……仪器分析 第十三页，共19页。 重现性试验(shìyàn)(示例) 试验 序号 称样量 （g） 测定值 （mg） 含量 （mg/g） 平均含量（ mg/g ） RSD （%） 1 0.1666 22.04 132.29 134.53 0.3% <2.0% 2 0.1667 24.82 148.89 3 0.1669 21.90 131.22 4 0.